馬褂木遺傳多樣性研究.pdf

1、本文對采自廣西分布區(qū)內全州縣安和鄉(xiāng)、樂業(yè)縣雅長鄉(xiāng)、資源縣兩水鄉(xiāng)、環(huán)江縣明倫鎮(zhèn)、融水縣安太鄉(xiāng)和老堡鄉(xiāng)共6個自然種群樣本和廣西咸水林場和高峰林場的種源試驗林中保存的9個種源（湖南步城、安徽休寧、江西廬山、湖北利川、福建武夷山、廣西全州、貴州黎平、云南金平、浙江安吉）的樣本通過ISSR分子標記技術進行遺傳多樣性研究，得到以下結論:
　　 (1)比較兩種馬褂木DNA提取方法，CTAB法與植物基因組試劑盒提取法，用植物試劑盒提取的DNA從

2、質量、純度、瓊脂糖凝膠凝膠電泳結果、穩(wěn)定性等方面都優(yōu)于CTAB法。
　　 (2)確定最終馬褂木ISSR-PCR擴增體系，最終ISSR-PCR擴增體系:總體積20μL中含有10×buffer為2.0μL、MgCl2濃度為1.8 mmol/L、dNTPs終濃度為0.2 mmol/L、引物終濃度為0.5μmol/L、TaqDNA聚合酶1U、DNA模板60 ng。
　　 最終的PCR擴增程序:94℃預變性5 min，94℃變性1

3、min，N℃退火45 s，72℃延伸2 min，45個循環(huán)，72℃完全延伸7 min，4℃保存。
　　 (3)引物篩選:可以擴增出較為清晰的引物為UBC-807、UBC-809、UBC-816、UBC-817、UBC-818、UBC-825、UBC-826、UBC-829、UBC-839、UBC-847、UBC-849、UBC-850、UBC-851、UBC-854、UBC-878、UBC-880、
　　 UBC-881

4、、UBC-887、UBC-889、UBC-890、UBC-891、本實驗的PCR擴增從上述引物中選出10條最清晰的多態(tài)性高的引物分別為UBC-807、UBC-818、UBC-825、UBC-826、UBC-829、UBC-847、UBC-881、UBC-889、UBC-890、UBC-891。
　　 (4)全州縣安和鄉(xiāng)、樂業(yè)縣雅長鄉(xiāng)、資源縣兩水鄉(xiāng)、環(huán)江縣明倫鎮(zhèn)、融水縣安太鄉(xiāng)和老堡鄉(xiāng)共6個自然種群的遺傳多樣性分析結果:共擴增出12

5、5個清晰的位點，其中有多態(tài)性的為122個，多態(tài)性百分率為97.60％;其中融水安太鄉(xiāng)的遺傳多樣性水平最高;6個自然群體間總的遺傳變異中有29.10％來自種群間，而種內遺傳變異70.90％，根據UPGMA聚類分析，馬褂木自然群體主要分為兩類，一類是環(huán)江和融水安太鄉(xiāng)、雅長，另一類是全州和融水老堡鄉(xiāng)、資源。
　　 (5)種源試驗林中保存的湖南步城、安徽休寧、江西廬山、湖北利川、福建武夷山、廣西全州、貴州黎平、云南金平、浙江安吉9個種源

6、樣本的遺傳多樣性分析結果:共擴增出126個清晰的位點，其中有多態(tài)性的為123個，多態(tài)性百分率為97.62％;其中湖北利川的遺傳多樣性水平最高;9個種源群體間總的遺傳變異中有25.37％來自種群間，而種內遺傳變異74.63％，根據UPGMA聚類分析，北部地區(qū)與南部地區(qū)可分為兩大類，南部地區(qū)又可大致細分為西部地區(qū)，中部地區(qū)和中東部地區(qū)。
　　 (6)根據廣西分布區(qū)自然群體和種源試驗保存的種源樣本的多樣性分析，提出了中國馬褂木種質資源