南嶺地區(qū)觀光木種群遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、I S S R A n a l y s i s o nG e n e t i c D i v e r s i t yo f T s o o n g i o d e n d r o n o d o r u mC h u n P o p u l a t i o n s f r o m t h eN a n l i n g M o u n t a i n sb yW U X u e q i nA t h e s i ss u b m i t

2、t e d i np a r t i a ls a t i s f a c t i o no f t h eR e q u i r e m e n t s f o rt h ed e g r e eo fM a s t e r o fS c i e n c e● l nG e n e t i c si nC e n t r a lS o u t h U n i v e r s i t yo f F o r e s t r ya n d

3、T e c h n o l o g y4 9 8S h a o s h a n S o u t hR o a d ，T i a n x i n D i s t r i c tC h a n g s h a H u n a n 4 10 0 0 4 ，E R ．C H I N AS u p e r v i s o rP r o f e s s o rX U G a n g b i a oA p r i l ，2 0 1 3捅 斐觀光木(

4、T s o o n g i o d e n d r o no d o r u m C h u n ) 為木蘭科植物，是古老的孑遺樹(shù)種，對(duì)研究古代植物區(qū)系、古地理、古氣候具有重要的科學(xué)價(jià)值。目前，觀光木天然種群量小，多數(shù)種群僅剩下幾株甚至1 株散生木，為偶見(jiàn)種，種群滅絕的風(fēng)險(xiǎn)很大，已被列為國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物。因此，開(kāi)展觀光木遺傳多樣性研究及保護(hù)工作已迫在眉睫。本論文以分布最為集中的南嶺地區(qū)觀光木種群為對(duì)象，開(kāi)展遺傳多樣性研究，主要研究結(jié)

5、果如下：( 1 ) 采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化影響觀光木I S S R ．P C R 擴(kuò)增的主要因子，建立了穩(wěn)定的、重復(fù)性好的I S S R ．P C R 反應(yīng)最佳體系( 2 0 此) ：模板D N A 5 0 n g 、T a q D N A聚合酶1 ．2 5U 、M g c l 2 2 ．5m m o l ／L 、d N T P s 0 ．2 5m m o l ／L 、引物0 ．4 肛m o l ／L 。擴(kuò)增反應(yīng)程序：9 4 ℃預(yù)變性5m i

6、 n ；9 4 ℃變性1m i n ， 退火3 0 s ( 退火溫度依引物而定) ，7 2 ℃延伸9 0 S ，3 5 個(gè)循環(huán)；7 2 ℃延伸7 m i n ；4 ℃保存。( 2 ) 利用I S S R ．P C R 優(yōu)化擴(kuò)增體系對(duì)南嶺地區(qū)1 4 個(gè)觀光木天然種群2 5 5 株個(gè)體進(jìn)行遺傳多樣性分析，篩選出8 條I S S R 引物共擴(kuò)增出1 8 2 條清晰、重復(fù)性高的條帶，其中1 4 5 個(gè)為多態(tài)條帶，多態(tài)條帶百分比為7 9 ．6 7

7、 ％，各種群尸值為9 ．3 4 ％～6 2 ．6 4 ％，平均為4 3 ．4 5 ％；各種群S h a n n o n 信息指數(shù)( D 為0 ．0 5 6 5 ～0 ．2 8 7 3 ，平均為0 ．2 0 5 4 。這表明，觀光木在物種水平和種群水平上都具有較高的遺傳多樣性。其中，廣東南昆山種群遺傳多樣性最高( P = 6 2 ．6 4 ，I = 0 ．2 8 7 3 ) ，廣東龍?zhí)督欠N群遺傳多樣性最低( 尸= 9 ．3 4 ％，I =

8、 0 ．0 5 6 5 ) 。分子方差( A M O Ⅶ) 分析顯示，6 2 ．4 2 ％的遺傳變異發(fā)生在種內(nèi)，3 7 ．5 8 ％的遺傳變異發(fā)生在種間，種群間遺傳分化明顯；聚類分析表明，采自貴州、湖南、廣西的種群聚類在一起，大部分江西種群聚類在一起，廣東車八嶺和大埔豐溪種群與江西定南種群聚類在一起，種群遺傳變異分布模式基本上與其地理生態(tài)格局一致。( 3 ) 觀光木天然和人工遷地保護(hù)種群遺傳多樣性分析表明，觀光木天然種群P 值和S h

9、a n n o n 信息指數(shù)( D 的平均值( 5 9 ．6 0 ％、0 ．2 8 4 7 ) 均高于人工遷地保護(hù)種群( 4 4 ．7 8 ％、0 ．2 3 3 3 ) ，說(shuō)明人工遷地保護(hù)種群遺傳多樣性降低。分子方差分析表明，天然和人工遷地保護(hù)兩類種群間的變異占總變異3 ．5 2 ％( d f = l ，胗0 ．0 5 ) ，表明這兩類種群類型遺傳結(jié)構(gòu)差異不顯著。( 4 ) 基于本研究結(jié)果，我們認(rèn)為，人為破壞活動(dòng)可能是觀光木瀕危的主要原