斑節(jié)對(duì)蝦酚氧化酶原基因的表達(dá).pdf

1、在大腸桿菌BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá)pET-28a(+)-proPO,SDS-PAGE和Western-blotting分析，均能檢測(cè)到一條分子量為79.4 kDa的特異性條帶，與推導(dǎo)的融合蛋白理論分子量(82.4 kDal)基本相符；包涵體變性后對(duì)經(jīng)Ni-NTA agarose純化的變性液進(jìn)行復(fù)性，復(fù)性液表現(xiàn)出0.3851單位/mg蛋白的PO活性；不同條件下的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果顯示，18℃時(shí)誘導(dǎo)培養(yǎng)能檢測(cè)到可溶性的目的蛋白表達(dá)，經(jīng)誘導(dǎo)9 h時(shí)后

2、可溶性的目的蛋白表達(dá)比例達(dá)到最高，約占菌體可溶性蛋白總量的5.56％；可溶性表達(dá)的目的蛋白經(jīng)純化、胰酶消化后，可檢測(cè)到分子量分別為60kDa、42.7 kDa的特異性條帶，并表現(xiàn)出0.4249單位/mg蛋白的PO活性。 將斑節(jié)對(duì)蝦酚氧化酶原(proPO)克隆進(jìn)昆蟲表達(dá)載體pIZT/V5-His中，構(gòu)建目的基因表達(dá)載體pIZT/V5-His-proPO。通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染家蠶Bm-N細(xì)胞，ZeocinTM篩選，得到穩(wěn)定表達(dá)proPO