2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、在大腸桿菌BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá)pET-28a(+)-proPO,SDS-PAGE和Western-blotting分析,均能檢測到一條分子量為79.4 kDa的特異性條帶,與推導(dǎo)的融合蛋白理論分子量(82.4 kDal)基本相符;包涵體變性后對經(jīng)Ni-NTA agarose純化的變性液進行復(fù)性,復(fù)性液表現(xiàn)出0.3851單位/mg蛋白的PO活性;不同條件下的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果顯示,18℃時誘導(dǎo)培養(yǎng)能檢測到可溶性的目的蛋白表達(dá),經(jīng)誘導(dǎo)9 h時后

2、可溶性的目的蛋白表達(dá)比例達(dá)到最高,約占菌體可溶性蛋白總量的5.56%;可溶性表達(dá)的目的蛋白經(jīng)純化、胰酶消化后,可檢測到分子量分別為60kDa、42.7 kDa的特異性條帶,并表現(xiàn)出0.4249單位/mg蛋白的PO活性。 將斑節(jié)對蝦酚氧化酶原(proPO)克隆進昆蟲表達(dá)載體pIZT/V5-His中,構(gòu)建目的基因表達(dá)載體pIZT/V5-His-proPO。通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染家蠶Bm-N細(xì)胞,ZeocinTM篩選,得到穩(wěn)定表達(dá)proPO

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