斑節(jié)對蝦酚氧化酶原基因的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在大腸桿菌BL21菌株中誘導表達pET-28a(+)-proPO,SDS-PAGE和Western-blotting分析，均能檢測到一條分子量為79.4 kDa的特異性條帶，與推導的融合蛋白理論分子量(82.4 kDal)基本相符；包涵體變性后對經(jīng)Ni-NTA agarose純化的變性液進行復(fù)性，復(fù)性液表現(xiàn)出0.3851單位/mg蛋白的PO活性；不同條件下的誘導表達結(jié)果顯示，18℃時誘導培養(yǎng)能檢測到可溶性的目的蛋白表達，經(jīng)誘導9 h時后

2、可溶性的目的蛋白表達比例達到最高，約占菌體可溶性蛋白總量的5.56％；可溶性表達的目的蛋白經(jīng)純化、胰酶消化后，可檢測到分子量分別為60kDa、42.7 kDa的特異性條帶，并表現(xiàn)出0.4249單位/mg蛋白的PO活性。 將斑節(jié)對蝦酚氧化酶原(proPO)克隆進昆蟲表達載體pIZT/V5-His中，構(gòu)建目的基因表達載體pIZT/V5-His-proPO。通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染家蠶Bm-N細胞，ZeocinTM篩選，得到穩(wěn)定表達proPO

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