磺胺類藥物多殘留ELISA快速檢測試劑盒與膠體金免疫層析試紙條的初探.pdf

1、實驗中采用4-氨基苯甲酸甲酯(PBPA)和對乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)為原料,經(jīng)過親和取代,酯的水解反應(yīng)合成磺胺藥物共有的母核結(jié)構(gòu)苯甲酸對氨基苯磺酰胺(SH),應(yīng)用質(zhì)譜法(ESI-MS)與核磁共振氫譜法(1H-NMR)鑒定SH。質(zhì)譜結(jié)果顯示[M-]=291.03766,與理論值[M]=292相符,表明SH合成成功;核磁共振氫譜(1H-NMR)的數(shù)據(jù)與SH化合物的結(jié)構(gòu)相符?；前纺负巳斯ぐ肟乖铣沙晒Α?br>　　實驗采用混合酸酐法將本實驗

2、室合成的磺胺類藥物母核結(jié)構(gòu)物(SH)與卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)相偶聯(lián),進而合成包被原 OVA-SH和免疫原 BSA-SH。紫外掃描(UV)與SDS-PAGE法進行確證。利用BSA-SH免疫Balb/C小鼠,間接ELISA和間接競爭ELISA法篩選細胞融合備用鼠;利用細胞融合雜交瘤技術(shù)建立了SH Mab細胞株,后體內(nèi)誘生腹水法制備SH Mab。對SH Mab的效價、特異性和敏感性等免疫學(xué)特性進行鑒定。結(jié)果顯示BSA-SH

3、人工抗原合成成功,SH與BSA的分子結(jié)合比約為11.6:1。5G1、5G2和8D23株敏感特異性的雜交瘤細胞株被成功篩選。其細胞上清液效價分別為:1:6.40×102、1:1.28×103和1:3.20×102,腹水效價分別為:1:2.56×105、1:5.12×105和1:1.28×105。5G2株所產(chǎn)腹水純化后所得 Mab對SH的半數(shù)抑制濃度(IC50)為82ng/mL。純化后Mab對磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺對甲氧嘧啶(SMD

4、)、磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺間二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺醋酰(SCT)、磺胺氯吡嗪鈉(SCZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲噁唑(SMZ)、磺胺苯吡唑(SPH)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、氨苯磺胺(SSF)和磺胺喹噁(SQ)的交叉反應(yīng)率分別為:108％、86%105%、85.6%、72%、26%、32%、54.6%、43%、4.6%、0.5%和76%。獲得了抗磺胺母核SH高效價、敏感、特異的Mab。
　　實驗將卵清白蛋白(OVA)與磺

5、胺母核人工半抗原(SH)采用混合酸酐法,按投料比1:2連接制備了包被原(SH-OVA),后將辣根過氧化物酶(HRP)與SH-OVA采用過碘酸鈉法,按投料比2:1連接制備了酶標抗原(SH-OVA-HRP)。直接競爭ELISA方法通過藥物競爭試驗被確定,在0-1000 ng/mL濃度范圍直接競爭ELISA建立標準曲線方程程為:y=-0.4016x+1.2187,相關(guān)系數(shù)R2=0.97,半數(shù)抑制濃度(IC50)為61.60ng/mL。SH酶聯(lián)