長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀相關(guān)基因差異表達(dá)的研究.pdf

1、長江三角洲白山羊是我國著名的筆料毛型山羊品種，其所產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)三類毛是制高檔毛筆的獨(dú)特原料。由于地方良種資源的保護(hù)重視程度不夠，國外山羊品種導(dǎo)入率不斷升高以及筆料毛山羊的管理方式、飼養(yǎng)條件的參差不齊，導(dǎo)致了目前優(yōu)質(zhì)筆料毛生產(chǎn)逐漸萎縮，優(yōu)質(zhì)筆料毛種質(zhì)資源的保護(hù)工作陷入了困難的境地，形勢較為嚴(yán)峻。目前，對(duì)長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的研究主要是集中在宏觀領(lǐng)域，而從分子水平闡明優(yōu)質(zhì)筆料毛生成的機(jī)理，在國內(nèi)外的研究中尚未見過相關(guān)的報(bào)道。因此，本研

2、究重點(diǎn)從分子水平上對(duì)長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀形成的機(jī)理進(jìn)行研究，以達(dá)到保護(hù)和利用好長江三角洲白山羊這一珍貴遺傳資源的目的，為今后分子選種和育種奠定基礎(chǔ)，具有非常重要的意義。
　　本試驗(yàn)旨在篩選長江三角洲白山羊皮膚中筆料毛性狀差異表達(dá)的基因，研究和探討差異表達(dá)的基因?qū)?yōu)質(zhì)筆料毛生成的影響和作用。利用mRNA差異顯示技術(shù)，比較優(yōu)質(zhì)筆料毛個(gè)體頸脊部與腹側(cè)部的皮膚組織，以及比較優(yōu)質(zhì)筆料毛個(gè)體與非筆料毛型個(gè)體頸脊部皮膚組織中基因的差異

3、表達(dá)，通過反向Northern點(diǎn)雜交去除假陽性條帶，經(jīng)克隆、測序后，得到的序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blastn檢索，與已知序列進(jìn)行同源性比較，并預(yù)測其功能。
　　研究結(jié)果顯示:(1)通過mRNA差異顯示共篩選出20條差異條帶，其大小在150～500bp之間，經(jīng)反向Northern點(diǎn)雜交驗(yàn)證，獲得6個(gè)陽性的差異表達(dá)片段;(2)差異片段克隆、測序后在NCBI數(shù)據(jù)庫中與已知序列進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)3個(gè)差異片段與已知功能基因相似，分別為

4、趨化素樣因子3(CKLF-like MARVEL transmembrane domaincontaining3，CMTM3)、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白/骨粘連蛋白(secreted protein，acidic, cysteine-rich/osteonectin，SPRAC)和鈣結(jié)合蛋白S100A4(S100 calcium bindingprotein A4，S100A4);其他3個(gè)片段與已知序列相似但功能未知。
　　分析

5、結(jié)果表明:(1) CMTM3基因過量表達(dá)可抑制雄性激素受體(androgen receptor，AR)的轉(zhuǎn)錄活性，可能會(huì)通過抑制AR轉(zhuǎn)錄活性的方式間接調(diào)控優(yōu)質(zhì)筆料毛的形成;(2)SPARC基因參與了多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并調(diào)節(jié)多種生長因子，如Wnt、FGF、TGF-β、IGF-1、血小板衍化生長因子(PDGF)等，可能通過這些信號(hào)通路和細(xì)胞因子影響毛發(fā)的結(jié)構(gòu)和形狀的形成，對(duì)長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛的形成產(chǎn)生一定的作用;(3)鈣結(jié)合蛋白S10

6、0A4基因與其他表皮分化相關(guān)基因共同定位于染色體lq21上（該區(qū)域?yàn)楸砥し只瘡?fù)合體），與皮膚分化、毛囊及皮膚腺體的成熟密切相關(guān)并參與毛發(fā)生長和周期循環(huán)。(4)三個(gè)功能未知的序列是毛發(fā)生長與毛發(fā)循環(huán)分子調(diào)控機(jī)制研究中的新發(fā)現(xiàn)，其功能需要進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　這些已知基因和未知片段對(duì)長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛的形成所起的作用還需要進(jìn)一步的研究，其調(diào)控機(jī)制還未完全闡明。本研究篩選出6個(gè)差異片段可以為今后進(jìn)一步研究長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛形