鵝腸道纖維素酶和蛋白酶活性分析以及纖維素降解菌的篩選.pdf

1、為了探索鵝腸道內(nèi)纖維素酶、蛋白酶的活性，并從腸道中分離篩選出高效的纖維素降解菌株，故本研究一方面對(duì)陽(yáng)江鵝和朗德鵝腸道內(nèi)纖維素酶活、蛋白酶活進(jìn)行了測(cè)定，比較這些酶活在不同腸段的活性大小;另一方面從陽(yáng)江鵝腸道分離了出了兩株高效降解纖維素的菌株，并研究了其最佳產(chǎn)酶的條件，最后結(jié)合形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)的特性進(jìn)行初步鑒定，為鵝合理的利用青飼料提供科學(xué)依據(jù)。本研究主要分為三個(gè)部分:
　　 試驗(yàn)一:陽(yáng)江鵝和朗德鵝腸道內(nèi)纖維素酶活、蛋白酶活的測(cè)定

2、。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明:各腸段纖維素酶活由高到低排序?yàn)?陽(yáng)江鵝各腸段纖維素酶活由高到低排序?yàn)?十二指腸＞空腸＞回腸＞肌胃＞盲腸。朗德鵝各腸段纖維素酶活排序?yàn)?空腸＞十二指腸＞回腸＞盲腸＞肌胃。
　　 各腸段蛋白酶活由高到低排序?yàn)?朗德鵝各腸段蛋白酶活由高到低排序?yàn)?空腸＞十二指腸＞盲腸＞回腸;陽(yáng)江鵝各腸段蛋白酶活由高到低排序均為:十二指腸＞空腸＞回腸＞盲腸。
　　 試驗(yàn)二:擬定從陽(yáng)江鵝腸道內(nèi)分離篩選出能夠降解纖維

3、素的纖維素降解菌株，然后研究該菌株在不同的溫度、時(shí)間、pH值條件下的產(chǎn)酶情況，從而對(duì)產(chǎn)酶的條件進(jìn)行優(yōu)化。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明:經(jīng)過(guò)篩選得到了19株能夠分解纖維素的降解菌，又經(jīng)過(guò)溶解圈的大小觀察，最終得到了兩株降解能力較強(qiáng)的菌株，為來(lái)自十二指腸的D-1和來(lái)自回腸的J-1。經(jīng)條件優(yōu)化以后，菌株D-1在42℃條件下，保持pH=6，培養(yǎng)48h以后酶活最高達(dá)到0.89U/mL。菌株J-1在42℃條件下，保持pH=6，培養(yǎng)48h以后酶活最高

4、達(dá)到0.94U/mL。雖然兩個(gè)菌株的最佳產(chǎn)酶條件相似，但是菌株J-1相較于D-1酶活較高，所以將菌株J-1作為下一步菌株鑒定試驗(yàn)的樣品。
　　 試驗(yàn)三:通過(guò)16SrDNA技術(shù)手段對(duì)目的菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定、分子生物學(xué)的鑒定。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明:菌株J-1，經(jīng)過(guò)與Gene bank數(shù)據(jù)庫(kù)里面的細(xì)菌16SrDNA序列的比對(duì)，比對(duì)結(jié)果顯示J-1的序列與枯草芽孢桿菌的序列相似性達(dá)到了99％。同時(shí)也結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、革蘭氏染色和分子