生防真菌分生孢子耐氧化力與多糖含量的關(guān)聯(lián)及球孢白僵菌轉(zhuǎn)錄因子BbAtf1的功能分析.pdf

1、作為重要的絲孢類昆蟲病原真菌，球孢白僵菌和玫煙色棒束孢因其易于生產(chǎn)和環(huán)境友好等優(yōu)點而在害蟲生防防治中廣受青睞。本研究旨在初步探求孢子氧化耐受力及其與孢子多糖含量的關(guān)系。球孢白僵菌和玫煙色棒束孢11株菌的經(jīng)脅迫后的殘存指數(shù)隨氧化劑H2O2濃度增加而減小。所有菌株的殘存指數(shù)均能良好地與Logistic方程擬合，并計算出各菌株的在氧化脅迫條件下半致死濃度。結(jié)果顯示玫煙色棒束孢孢子的耐氧力強于球孢白僵菌。兩種真菌的分生孢子耐氧力與各自多糖含量呈

2、現(xiàn)良好線性正相關(guān)。培養(yǎng)基碳源成分和濃度變化可影響球孢白僵菌孢子氧化耐受力，但耐氧化力與多糖含量依舊呈現(xiàn)線性正相關(guān)。由此可見，生防真菌分生孢子的氧化耐受力的確與多糖積累有關(guān)，并一定程度上受培養(yǎng)條件的調(diào)節(jié)。這有望為提高生防真菌孢子環(huán)境穩(wěn)定性提供新的策略。
　　 球孢白僵菌基因Atf1的功能分析Atf1是MAPK途徑的下游效應(yīng)基因，3'，5'-環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)家族的重要成員，廣泛表達于各種組織，參與細胞代謝、細胞

3、結(jié)構(gòu)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄和突觸傳遞等多種細胞生命活動。本論文采用同源重組策略構(gòu)建了基因缺失Atf1菌株。研究結(jié)果表明該基因參與球孢白僵菌生長、抗逆及侵染的各個階段。45℃濕熱脅迫下，突變菌株ΔAtf1的LT50(49.96min)小于野生株(82.50min)，下降幅度達39.4％;在H2O2脅迫下突變菌株ΔAtf1的EC50(1.13mM)小于野生株(1.69mM)，下降幅度達33.1％;UV-B輻射下，突變菌株ΔAtf1的LD50(

4、0.31J/cm2)小于野生株(0.46J/cm2)，下降幅度達32.6％;通過體壁侵染的方法，野生株和敲除株對大蠟螟幼蟲的半致死時間LD50分別為3.55天和4.14天，敲除株與野生株相比，LD50延長即毒力下降16.5％。實時定量PCR結(jié)果顯示，cat4和sod3兩種酶受該基因調(diào)控，在球孢白僵菌發(fā)揮抗氧化能力方面發(fā)揮重要作用。由此可見，Atf1在球孢白僵菌中起著重要作用，尤其是在抗氧化方面。研究結(jié)果為進一步解析殺蟲真菌致病機理和菌株