辣椒CabZIP1轉(zhuǎn)錄因子的功能分析.pdf

1、bZIP是植物較大的轉(zhuǎn)錄因子基因家族之一，在植物生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆防御反應(yīng)中起著十分重要的調(diào)節(jié)作用，但迄今對(duì)該家族的大部分成員的功能還所知甚少。辣椒是一種重要的茄科植物和具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的蔬菜，也是病害十分嚴(yán)重忌連作的作物。鑒于bZIP在植物生長(zhǎng)發(fā)育和對(duì)逆境抗性方面的可能重要作用，分析辣椒bZIP家族不同成員有利于揭示辣椒生長(zhǎng)發(fā)育及抗逆的分子機(jī)制。因此，在本實(shí)驗(yàn)室前期分離獲得辣椒CabZIPl的全長(zhǎng)cDNA并構(gòu)建成其相應(yīng)超表達(dá)載體、病毒介導(dǎo)

2、基因沉默載體的基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步通過(guò)熒光定量PER分析了該基因在不同逆境脅迫及外源激素處理下的表達(dá)，并通過(guò)超表達(dá)和病毒誘導(dǎo)基因沉默(VIGS)的方法分析了其功能，主要研究結(jié)果如下：
　　 1、通過(guò)熒光定量PCR分析CabZIPl基因在各種逆境脅迫下的辣椒幼苗中的表達(dá)，結(jié)果表明在低溫、NaCl和H2O2處理下，CabZIPl基因表達(dá)量相對(duì)上調(diào)；外源SA處理CabZIPl基因的表達(dá)量明顯下調(diào)；機(jī)械損傷后6h內(nèi)CabZIPl基因的轉(zhuǎn)

3、錄表達(dá)明顯升高，6h后則下降。
　　 2、構(gòu)建CabZIPl基因超表達(dá)載體共獲得T0代植株45棵并獲得其相應(yīng)的T1代株系的足夠種子。利用T1代轉(zhuǎn)基因株系研究CabZIPl超表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)逆境抗性的影響，發(fā)現(xiàn)CabZIPl基因在煙草中超表達(dá)可提高煙草對(duì)NaCl的抗性，并對(duì)外源ABA處理表現(xiàn)出一定程度的抗性，對(duì)青枯菌接種表現(xiàn)出易感，但對(duì)高溫和低溫的抗性與其野生型對(duì)照無(wú)明顯差異。這些結(jié)果說(shuō)明CabZIPl是植物抗鹽脅迫的正調(diào)節(jié)因子

4、，但卻是對(duì)病原菌侵染抗性的負(fù)調(diào)節(jié)因子；采用熒光定量PCR研究表明，CabZIPl在煙草中超表達(dá)使203、515、H1N1和PR1等病程相關(guān)基因表達(dá)下降，而201和PR3的表達(dá)升高，對(duì)PR2表達(dá)沒(méi)有明顯的影響。
　　 3、病毒誘導(dǎo)基因沉默(Virus induced gene silence，VIGS)研究表明CabZIPl基因沉默可一定程度提高植株對(duì)青枯菌侵染的抗性，但對(duì)鹽脅迫則較對(duì)照更為敏感。
　　 上述結(jié)果表明Cab