馬尾松種質(zhì)資源分子評價與體胚發(fā)育技術(shù)研究.pdf

1、馬尾松(PinusmassonianaLamb.)是中國南方亞熱帶地區(qū)分布最廣的針葉造林樹種，其耐干旱瘠薄、適應(yīng)性強、生長速度快，廣泛用于制漿造紙、建筑、松香等人工林建設(shè)。然而馬尾松良種選育周期長、良種供應(yīng)不足、無性繁殖困難，極大地制約著馬尾松高效人工林的發(fā)展，本論文采用ISSR分子標記技術(shù)，對湖南城步馬尾松種子園117個優(yōu)良無性系親本材料，進行群體遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳關(guān)系分析，種質(zhì)遺傳異質(zhì)性鑒定;并對影響馬尾松幼胚體胚發(fā)育的幾個關(guān)鍵因素進行

2、了系統(tǒng)研究，建立了馬尾松體胚發(fā)育技術(shù)體系，以期為發(fā)展馬尾松短周期育種策略提供技術(shù)支撐，主要研究內(nèi)容及成果如下:
　　 1)在117個無性系中ISSR標記檢測到豐富的遺傳多樣性。不同種源群體由于受到種質(zhì)起源時遺傳基礎(chǔ)寬窄的影響以及湖南地理氣候的選擇作用，表現(xiàn)出遺傳多樣性的差異性。10個ISSR引物共檢測到的210個多態(tài)位點，位點出現(xiàn)頻率在0.0044～0.9744之間，平均為0.4174;10個引物的香農(nóng)熵值分布在4.657～6.

3、160之間，平均為5.283;不同種源間P值分布在77.98％～90.37％范圍內(nèi)，總的多態(tài)位點百分率P值為96.33％，;6個種源群體內(nèi)期望雜合度(He)分布在0.3598～0.4252之間，平均為0.3887;種源群體遺傳分化固定指數(shù)Fst值分布在0.3176～0.3414之間，平均為0.3276;種源群體的平均遺傳異質(zhì)性指數(shù)MDIST為0.3306～0.3414之間，平均為0.3352;從以上種源群體遺傳多樣性數(shù)值分析表明，現(xiàn)湖南

4、選育的廣西種源群體無性系遺傳基礎(chǔ)較窄，遺傳異質(zhì)性高。
　　 2)以Structure2.3.4對117個無性系聚類可分為最優(yōu)3組，分組群體間遺傳變異占總變異的11.32％，高于種源模型(2.60％)、地理氣候區(qū)模型(2.77％)和省份模型(2.72％)的AMOVA分析的群體間變異量比例，相應(yīng)的Structure2.3.4模擬分組的群體內(nèi)變異為88.68％，這樣Structure2.3.4的模擬分組分析，提高了不同分組群體間的遺傳

5、變異比例，有利于在不同分組群體內(nèi)選擇雜交親本，提高馬尾松種子園的雜種優(yōu)勢。種源群體間的遺傳變異比例小于地理氣候分區(qū)群體間遺傳變異比例的結(jié)果表明，
　　 各個激素影響因素的主次排序為6-BA＞KT＞NAA＞2，4-D，誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素組成優(yōu)方案推薦為:LP+2，4-D2.0mg/L+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT1.0mg/L;對胚性愈傷組織誘導(dǎo)質(zhì)量而言，激素因素主次排序為KT＞NAA＞2，4-D＞6-BA，提高

6、愈傷誘導(dǎo)質(zhì)量的優(yōu)方案推薦為:LP+2，4-D0.5mg/L+6-BA1.5mg/L+NAA0.3mg/L+KT0.5mg/L。低濃度的2，4-D有利于馬尾松胚性愈傷組織的質(zhì)量提高。
　　 7)馬尾松胚性傷增殖培養(yǎng)中，胚性愈傷繼代培養(yǎng)的次數(shù)有限，這與胚性胚柄細胞團內(nèi)胚性細胞所處的發(fā)育階段以及發(fā)育階段的不同步密切相關(guān)。隨著繼代次數(shù)的增加，胚性愈傷外觀形態(tài)表現(xiàn)上趨于老化，在顯微細胞學(xué)水平觀察，表現(xiàn)胞質(zhì)濃厚的胚頭細胞數(shù)量增多、液泡化胚柄