馬尾松的組織培養(yǎng).pdf

1、以馬尾松（Pinus massoniana Lamb．）優(yōu)良種源廣西桐棉成熟種子為起始材料，以無菌實生苗頂芽為外植體，進行不定芽誘導、伸長、增殖和不定根誘導及其發(fā)生的解剖學觀察并進行了煉苗和移栽等試驗，對馬尾松組織培養(yǎng)進行了系統(tǒng)研究，初步建立了馬尾松快速繁殖體系，研究結(jié)果表明：
　　 1.低濃度的GA對馬尾松種子發(fā)芽表現(xiàn)出抑制作用，當GA濃度達到100mg/L時催芽效果明顯好于對照，本試驗最好的催芽方式為：GA（100mg/L）

2、開蓋催芽24h。
　　 2.馬尾松種子消毒試驗試驗中最佳的滅菌組合為15（75％酒精3min+0.1％HgCl215min+3％NaClO25min）發(fā)芽率最高為23.22％，方法12（75％酒精3min+0.1％HgCl220min+3％NaClO20min）次之，方法1最差，其發(fā)芽率僅為2.67％，適當?shù)难娱L0.1％HgCl2的滅菌時間可以提高滅菌率，但對種胚產(chǎn)生傷害。種子滅菌不宜用高濃度的HgCl2作為滅菌劑。
　　

3、 3.不同苗齡的實生苗頂芽消毒的難易程度不同，苗齡大消毒難度大，污染率高，苗齡小對消毒劑比較敏感，消毒劑的毒害作用比較明顯，死亡率比較高。苗齡為9d的頂芽滅菌效果最好，污染率僅有3.3％，其成活率也最高，為93.3％；消毒劑的消毒時間對外植體的消毒效果有明顯的影響，隨著消毒時間的延長，污染率降低，褐化死亡率升高，組合為75％酒精10s+0.1％HgCl28min時，馬尾松實生苗頂芽的滅菌效果最好，滅菌率最高，為96.3％，成活率為92

4、.6％。
　　 4.不同苗齡、6-BA、NAA濃度對初次芽誘導的影響試驗結(jié)果表明：不同苗齡對馬尾松不定芽的初次誘導率和增殖系數(shù)有顯著的影響，80d苗齡接種于附加2mg/L6-BA以及0mg/LNAA的DCR培養(yǎng)基中生長7周后子葉基部大部分誘導出不定芽；6-BA對提高不定芽的初次誘導率作用也很明顯，但對增殖系數(shù)的提高作用不很明顯；NAA對不定芽的初次誘導率和增殖率的提高作用不明顯，所設置的濃度梯度對誘導率和增殖率作用差異不顯著。本

5、試驗中誘導率和增殖系數(shù)最高的最佳組合為16（苗齡80 d+6-BA2.0 mg/L+NAA0mg/L）誘導率達到87.23％，增殖系數(shù)最高為3.26。
　　 5.在馬尾松不定芽伸長試驗中蔗糖和活性炭對伸長有明顯的促進作用，生長激素對其伸長促進作用不很明顯。組合7（活性炭0.1％+蔗糖30g/L+NAA0.3mg/L）最有利于馬尾松不定芽的伸長，伸長率達到126.6％，其次為組合8（活性炭0.2％+蔗糖40g/L+NAA0.2 m

6、g/L）伸長率達到117.3％。
　　 6.在多次繼代后不定芽的增殖試驗中，NAA對誘導率的作用隨濃度的遞增呈現(xiàn)出先增后降的趨勢，適當?shù)蜐舛鹊腘AA對不定芽的增殖率的提高有一定的促進作用，而高濃度（0.05mg/L）時增殖率明顯降低，對增殖率起抑制作用，以0.03 mg/L最好，增殖率隨6-BA濃度的提高而提高，因此高濃度的6-BA對增殖率提高有促進作用；組合8（6-BA2.0mg/L+NAA0.03mg/L）和組合9（6-BA

7、2.5mg/L+NAA0.03mg/L）增殖率最高到達100％；組合4（6-BA3.0mg/L+NAA0.01mg/L）增殖系數(shù)最高到達5.03。
　　 7.在馬尾松不定根誘導試驗中，培養(yǎng)基是影響生根效應的主要因子，NAA的加入有利于根的伸長和須根的產(chǎn)生；IBA的加入有利于大量根的產(chǎn)生和根的增粗，但須根較少，且濃度大于2.0 mg/L時產(chǎn)生大量愈傷組織，延遲了生根時間，最適生根培養(yǎng)基組合是1/3DCR+NAA0.15 mg/L+

8、蔗糖20％+瓊脂0.6％，兩個月最高生根率達到51.7％，須根多，根系質(zhì)量高；經(jīng)過伸長生長的多次繼代增殖芽的生根率明顯高于其它苗源，25d生根率即可達到33.33％，45d生根率達到75％，且不定根數(shù)目多，根系健壯。同時對馬尾松組培苗發(fā)育過程進行了解剖學觀察，結(jié)果表明馬尾松組培苗嫩莖無潛伏根原基，不定根由誘生根原基發(fā)育形成，誘導根原基源于髓射線細胞的分化。
　　 8.煉苗試驗中：（1）在T3（閉蓋21d）+t2（開蓋2d）處理下

9、，組培苗生長狀態(tài)良好，移栽成活率最高，均值達到78.89％，隨著閉蓋煉苗時間的增加成活率呈上升趨勢，但隨著開瓶煉苗時間的增加，成活率呈先增后降趨勢；（2）不同基質(zhì)組成及配比對試管苗的成活率具有顯著的影響，最佳組合為A3（0.1％多菌靈浸泡30min）+B3（黃心土：河沙：珍珠巖=3：2：2），成活率達到88.65％；（3）根條數(shù)多利于移栽成活，根長度大于4cm和小于2cm不利于移栽成活。
　　 9.根誘導培養(yǎng)天數(shù)對馬尾松組培苗移

10、栽的成活率有顯著影響。根誘導培養(yǎng)80d的組培苗，移栽成活率在80％以上；開蓋煉苗后罐頭瓶中加入無菌水和0.05％多菌靈比不加任何物質(zhì)的對照可以明顯減少煉苗階段的污染；煉苗中污染的生根苗經(jīng)過多菌靈和酒精消毒后移栽成活率明顯高于對照，最佳消毒效果組合為0.1％多菌靈30min+75％酒精20s，成活率到達90％。
　　 綜上所述，通過馬尾松組織培養(yǎng)試驗，已經(jīng)建立了馬尾松快速繁殖體系，以不同途徑獲得的馬尾松無菌芽為外植體實現(xiàn)了不定根的