煙草根際黑脛病拮抗菌生素合成的分子與生化檢測.pdf

1、從貴州采集煙草根際土壤中，篩選到22株對煙草黑脛病菌具有較強、穩(wěn)定拮抗能力的菌株。對拮抗細菌進行形態(tài)學觀察生理生化檢測，16SrRNA基因擴增與測序、Blast比對，完成鑒定，芽孢桿菌有14株。
　　 為研究此22株拮抗細菌能否產(chǎn)生依枯草菌素A(iturinA)、桿菌霉素D(bacillomycinD)、豐原素(fengycin)、表面活性肽(surfactin)，用iturinA、bacillomycinD、fengycin、

2、surfactin的特異引物通過PCR擴增這些菌株的生物合成基因，22株拮抗細菌有9株檢測到iturinA生物合成基因，5株檢測到bacillomycinD生物合成基因，13株檢測到surfactin生物合成基因，沒有菌株檢測到fengycin生物合成基因。14株芽孢桿菌菌株中有6株具有iturinA生物合成基因，3株具有bacillomycinD生物合成基因，11株具有surfactin生物合成基因。Bacillus altitudi

3、nisZAH3具有iturinA、surfactin生物合成基因，Bacillus flexusWCH1具有bacillomycin D生物合成基因，Delftia tsuruhatensisMTH23具有surfactin生物合成基因，Alcaligenes faecalis RHH48具有bacillomycin D生物合成基因，Kocuria palustris WCH21具有iturinA生物合成基因，Aqrobacterium

4、 tumefacies YQH34具有iturinA生物合成基因，Tetrathibadter kashmirensis WCH18具有surfactin生物合成基因。
　　 利用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight-masss pectrometry，MALDI-TOF-MS)檢測菌株ZAH3、WCH1、MTH23

5、、RHH48、WCH21、YQH34、WCH18抗生素的合成。ZAH3可產(chǎn)生surfactin，WCH1可產(chǎn)生bacillomycinD，MTH23可產(chǎn)生surfactin，RHH48可產(chǎn)生bacillomycinD和fengycin，WCH21可產(chǎn)生iturinA和fengycin，YQH34可產(chǎn)生iturinA，WCH18可產(chǎn)生surfactin和fengycin。
　　 MALDI-TOF-MS結果與PCR結果不完全一致，

6、菌株ZAH3通過PCR檢測到iturinA生物合成基因卻未通過MALDI-TOF-MS檢測到iturinA，菌株RHH48、WCH21、WCH18未通過PCR檢測到fengycin生物合成基因卻通過MALDI-TOF-MS檢測到fengycin。
　　 在不同菌株的質譜中占主要類型的抗生素不同，這表明盡管有些菌株具有多種抗生素的生物合成基因，但在一定時間只有一或兩種抗生素能夠大量產(chǎn)生，在特定條件下起作用的主要抗生素也因菌株而異，

7、該研究的結果表明特殊菌株產(chǎn)生的大多數(shù)抗生素可能受細菌遺傳因素影響并受環(huán)境信號誘導。
　　 本研究首次對Bacillus altitudinis、Agrobacterium tumefaciens、Delftia tsuruhatensis、Kocuria palustris、Bacillus flexus、Tetrathibadter kashmirensis進行產(chǎn)抗生素檢測。
　　 生物防治中有與抗生素一起發(fā)揮協(xié)同作用