兩株煙草黑脛病和青枯病拮抗菌的誘變選育.pdf

1、煙草黑脛病(Phytophthora parasitica)和煙草青枯病(Ralstonia solanacearum)是煙草上除煙草病毒病和煙草赤星病以外發(fā)生最普遍、危害最嚴(yán)重的侵染性病害。在煙草病害的多種防治方法中，農(nóng)藥防治對(duì)煙葉的品質(zhì)和安全性影響較大，而生物防治對(duì)煙葉生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展具有較好的應(yīng)用前景。芽孢桿菌(Bacillus spp．)具有顯著的生防潛力，是病害生防微生物的重要組成部分。熒光假單胞桿菌(Pseudomonasf

2、luorescent)廣泛存在于土壤中，其多數(shù)株系具有防治植物病害和促進(jìn)植物生長(zhǎng)的雙重功效。本研究通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的，對(duì)黑脛病和青枯病有良好拮抗作用的芽孢桿菌和熒光假單胞桿菌進(jìn)行人工誘變、篩選出對(duì)青枯病和黑脛病擁有更好效果的拮抗菌。 1．通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的黑脛病和青枯病拮抗菌進(jìn)行篩選，初步得到兩株對(duì)黑脛病和青枯病有較好溫室防效的菌株：B-16-11和P-71-2，作為誘變實(shí)驗(yàn)的出發(fā)菌株。其中B-16-11對(duì)青枯病溫室控病的相對(duì)防

3、效為71.83％；P-71-2對(duì)黑脛病溫室控病的相對(duì)防效為65.32％、對(duì)青枯病溫室控病的相對(duì)防效為66.68％。 2．通過(guò)對(duì)紫外線(xiàn)、微波誘變致死率及正變率之間的比較，選擇：30W紫外燈距離20cm處紫外線(xiàn)誘變時(shí)間為3min為宜，且菌株的遺傳穩(wěn)定性較高；微波誘變時(shí)間兩株拮抗菌為3min；通過(guò)LiCl致死率與濃度之間比較，選擇LiCl濃度：芽孢桿菌為0.6％、熒光假單胞桿菌為0.4％。 3．通過(guò)紫外線(xiàn)誘變，得到抑菌帶寬度1

4、4mm以上或抑菌圈寬度28mm以上正向突變菌株8株，其中UV—P17的對(duì)黑脛病抑菌帶寬度達(dá)到15.2mm、對(duì)青枯病抑菌圈直徑達(dá)到28mm。通過(guò)溫室控病測(cè)試，篩選出正向突變拮抗菌UV—P17，其對(duì)黑脛病的相對(duì)防效達(dá)到78.7％。 4．通過(guò)微波誘變，得到拮抗性能顯著增強(qiáng)的正向突變菌株12株，其中Mw—P3、Mw—P44、Mw—P97、Mw—P73的對(duì)黑脛病抑菌帶寬度達(dá)到15.2mm、15.8mm、15.4mm、15.8mm；Mw—B

5、54、Mw—P99對(duì)青枯病抑菌圈直徑達(dá)到29mm。通過(guò)溫室控病測(cè)試，篩選出煙草黑脛病菌拮抗菌2株，Mw—P44、Mw—P73的相對(duì)防效為76.9％和71.6％。 5．通過(guò)紫外線(xiàn)+氯化鋰誘變，得到拮抗性能顯著增強(qiáng)的正向突變菌株13株，其中UVL—P9號(hào)菌株對(duì)青枯病菌的抑菌圈直徑達(dá)到29mm，對(duì)黑脛病菌抑菌帶寬度達(dá)到16mm。通過(guò)溫室控病測(cè)試，未篩選出正向突變菌株。 6．通過(guò)微波+氯化鋰誘變，得到拮抗性能顯著增強(qiáng)的正向突變菌

6、株16株，其中MwL—B108和MwL—B73菌株對(duì)青枯病菌的抑制效果最好，抑菌圈直徑達(dá)到30mm；MwL—P26對(duì)青枯病菌和黑脛病菌的平板拮抗效果都有提高，對(duì)青枯病菌的抑菌圈直徑達(dá)到29mm，對(duì)黑脛病菌抑菌帶寬度達(dá)到15.3mm。通過(guò)溫室控病測(cè)試，篩選出正向突變菌株5株，其中MwL—P77對(duì)黑脛病相對(duì)防效為84％、MwL—B24對(duì)青枯病相對(duì)防效達(dá)到82.2％、MwL—P26和MwL—P53對(duì)煙草青枯病和黑脛病的相對(duì)防效都在68％以上。