煙草青枯病拮抗菌的篩選及抗菌物質(zhì)的研究.pdf

1、煙草是我國的重要經(jīng)濟(jì)作物，種植面積和總產(chǎn)量居世界第一，也是煙農(nóng)收入、地方和國家財政收入的重要來源之一。 煙草青枯病是煙草的主要病害之一，危害嚴(yán)重，謂之“煙癌”。1880年首次發(fā)現(xiàn)于美國，目前，在我國西南煙區(qū)普遍發(fā)生，在疫區(qū)常呈暴發(fā)流行，造成毀滅性損失，發(fā)病嚴(yán)重時產(chǎn)量損失80％左右。 為有效防治煙草青枯病，我們從貴州省青枯病遲發(fā)煙地和不發(fā)煙地中初步篩選出15株拮抗微生物，通過拮抗能力的鑒定，篩選出拮抗力較強(qiáng)的放線菌1株和真

2、菌2株，并對它們產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)進(jìn)行了粗提和活性檢驗。結(jié)果表明： (1)經(jīng)青枯病平板拮抗試驗篩選出15個菌株，包括細(xì)菌3株，放線菌3株，真菌9株，真菌多屬木霉、青霉屬。細(xì)菌的拮抗效果相對較差，放線菌和真菌較強(qiáng)。指的值得注意的是，從中性紫色土中獲得的菌株拮抗能力＞黃色石灰土＞黃壤，這與貴州煙區(qū)青枯病的發(fā)生情況相符，即黃壤的發(fā)病率最高，其次是黃色石灰土，中性紫色土發(fā)病率最低。依據(jù)抑菌圈大小，經(jīng)反復(fù)平板拮抗試驗，篩選出3株有優(yōu)良拮抗效應(yīng)

3、的拮抗菌株，分別是放線菌1株(actinomycete)和2株真菌(fungus)依次命名為A-01，F(xiàn)-01和F-02。 (2)通過液體發(fā)酵培養(yǎng)A-01，F(xiàn)-01和F-02，在發(fā)酵液中均檢測到拮抗青枯病菌的抗菌物質(zhì)，且有較好的抑菌效果。在青枯菌的培養(yǎng)液中加入過濾后的A-01，F(xiàn)-01和F-02發(fā)酵液，顯著抑制青枯菌的生長。若發(fā)酵液加入量相同，抑制青枯菌生長的效果F-02＞F01＞A-01。 (3)液體發(fā)酵試驗表明，F(xiàn)-

4、02產(chǎn)生的抗菌活性物質(zhì)在菌株在生長時即產(chǎn)生，隨著菌量的增加而增加。發(fā)酵24h開始產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，48～120h是產(chǎn)生的高峰期。 (4)通過離心、超濾、濃縮等簡單的純化，發(fā)現(xiàn)3個菌株分泌抗菌物質(zhì)活性有顯著差異。其中，F(xiàn)-02的活性最強(qiáng)，F(xiàn)-01次之，A-01最低，抗菌活性相差近20倍。 (5)熱穩(wěn)定性試驗研究表明，F(xiàn)-02所產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)耐高溫，溫度變化于5～120℃不會顯著改變其活性，初步估計該抗菌活性物質(zhì)非蛋白質(zhì)類。