煙草黑脛病拮抗菌的篩選、鑒定和生防潛力評(píng)價(jià).pdf

1、利用稀釋涂布平板法，從黑脛病煙株的根部土壤中篩選獲得了3株防治黑脛病的高效拮抗菌XCS007、YBM-4和YJC-4。通過對(duì)峙培養(yǎng)法和牛津杯法驗(yàn)證了3株拮抗菌及其粗提物對(duì)煙草黑脛病的抑菌效果。探究了3株拮抗菌的最適生長(zhǎng)條件（溫度、初始pH和培養(yǎng)時(shí)間），利用形態(tài)學(xué)、生理生化特性和16S rDNA序列相似性分析，對(duì)3株拮抗菌的系統(tǒng)分類地位進(jìn)行了鑒定。同時(shí)，測(cè)定了幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶的活性，在盆栽和大田試驗(yàn)中，調(diào)查了XCS007及其

2、粗提物、YBM-4、YJC-4和XCS007+YBM-4+YJC-4混劑（比例1∶1∶1）的防病和控病效果。具體如下:
　　1.從煙草黑脛病病株根部土壤中篩選獲到324株細(xì)菌，利用對(duì)峙培養(yǎng)法，得到XCS007、YBM-4和YJC-4拮抗菌對(duì)煙草黑脛病的相對(duì)抑菌率分別達(dá)到91.80％、85.34％和72.99％，除有明顯的抑菌圈外，黑脛病菌絲邊緣處均有明顯的溶解現(xiàn)象，抑制菌絲的正常生長(zhǎng)和擴(kuò)展，表明3種拮抗菌具有顯著的抑菌效果。通過牛

3、津杯法，XCS007拮抗菌粗提物的抑菌效果最為明顯，YBM-4和YJC-4拮抗菌粗提物有一定的抑菌作用。
　　2.研究發(fā)現(xiàn)，XCS007拮抗菌的最適生長(zhǎng)溫度為30℃，最適pH為7.5，最適培養(yǎng)時(shí)間為48h。YBM-4拮抗菌，在32.5℃，pH=7.5條件下，培養(yǎng)60 h，菌株生物量最高。YJC-4拮抗菌最適生長(zhǎng)溫度為35℃，該溫度下培養(yǎng)60h生物量最大，當(dāng)初始pH=4.5時(shí)菌落幾乎不生長(zhǎng)。
　　3.XCS007為革蘭氏陰性菌

4、，具有運(yùn)動(dòng)性，明膠液化明顯，產(chǎn)生氧化酶、亞硝酸鹽和N2，可以利用檸檬酸鹽和分解葡萄糖;V-P和甲基紅試驗(yàn)顯陰性，不能利用果聚糖和淀粉。當(dāng)鈉鹽濃度在3％時(shí)，最大生長(zhǎng)量為2.11×108 cfu/mL。綜合菌株的形態(tài)特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析結(jié)果，鑒定XCS007為銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa。YBM-4為革蘭氏陽(yáng)性菌，V-P測(cè)驗(yàn)和甲基紅試驗(yàn)顯陽(yáng)性，能利用檸檬酸鹽，水解淀粉、葡萄糖，產(chǎn)生亞硝酸鹽

5、和N2;氧化酶和明膠液化顯陰性，不分解果聚糖。隨著鈉鹽濃度的增加，拮抗菌的生長(zhǎng)和繁殖受到明顯的抑制。YBM-4與枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis(KT985478.1)的序列相似性為99％，故YBM-4鑒定為枯草芽孢桿菌。YJC-4為革蘭氏陽(yáng)性菌，在氧化酶、V-P和甲基紅檢驗(yàn)中顯陽(yáng)性，可以利用檸檬酸鹽，分解葡萄糖、果聚糖，產(chǎn)生大量亞硝酸鹽和N2;明膠液化顯陰性，不能水解淀粉。在2％氯化鈉的培養(yǎng)基中，拮抗菌生長(zhǎng)量最大，為2.

6、21×109 cfu/mL。YJC-4與沙福芽孢桿菌Bacillussafensis(JF411315.1)的序列相似性為99％，鑒定YJC-4為沙福芽孢桿菌。
　　4.XCS007拮抗菌產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶的活性呈現(xiàn)“先增加后減少”的總體趨勢(shì)。當(dāng)拮抗菌培養(yǎng)5d時(shí)，幾丁質(zhì)酶活性最高，為1.23 U/mL，當(dāng)培養(yǎng)6d時(shí)，β-1，3-葡聚糖酶活性最高，1.96 U/mL。YJC-4拮抗菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶，在第6d時(shí)，酶活性最

7、高為0.67 U/mL，在第4d時(shí)，β-1，3-葡聚糖酶活性最高為0.88 U/mL。YBM-4拮抗菌的β-1，3-葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶活性接近零。
　　5.盆栽試驗(yàn)中，施藥后第7d，7組處理對(duì)煙草黑脛病均呈現(xiàn)顯著的抑制效果。14d時(shí)，XCS007及其粗提物、YBM-4、YJC-4和XCS007+YBM-4+YJC-4混劑（比例1∶1∶1）五個(gè)處理的防效分別為77.27％、75.78％、73.03％、78.94％和80.41％。AU