糖皮質(zhì)激素影響肉仔雞骨骼肌蛋白質(zhì)合成的途徑研究.pdf

1、本研究利用外源導(dǎo)入糖皮質(zhì)激素的方法，從體內(nèi)和體外兩個(gè)試驗(yàn)?zāi)Ｐ吞接懱瞧べ|(zhì)激素導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成發(fā)生改變的機(jī)制。體內(nèi)試驗(yàn)中，研究了糖皮質(zhì)激素對肉仔雞胸肌蛋白質(zhì)合成的影響，以及日糧氨基酸和能量對糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)效應(yīng)的互作，初步探討了糖皮質(zhì)激素調(diào)控胸肌蛋白質(zhì)合成的作用通路。此外，通過體外成肌細(xì)胞模型的建立，探索糖皮質(zhì)激素對成肌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的調(diào)控，并進(jìn)一步驗(yàn)證糖皮質(zhì)激素調(diào)控成肌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的信號(hào)通路。
　　 開展了三個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)：試驗(yàn)一選取3

2、6日齡體重相近的AA雄性肉仔雞，隨機(jī)分兩個(gè)處理，早晚各分別注射地塞米松(DEX，1mg/KgBM)和相同體積的生理鹽水，注射3天，38日齡20:00空腹12h后每個(gè)處理分別灌服亮氨酸(500mg/KgBM)、葡萄糖(2.5ml/KgBM)、兩者混合液及生理鹽水(5ml)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素處理導(dǎo)致骨骼肌發(fā)育受阻，生產(chǎn)性能下降；糖皮質(zhì)激素處理可使胸肌AMPKα2和IGF-I的mRNA表達(dá)水平顯著降低，mTOR、Akt1、4E-BP1和S6

3、K1mRNA的表達(dá)量顯著升高；在糖皮質(zhì)激素處理的條件下，灌服亮氨酸可顯著降低胸肌IGF-I和4E-BP1的mRNA表達(dá)量。結(jié)果表明，糖皮質(zhì)激素可通過AMPK和mTOR信號(hào)通路來影響胸肌蛋白質(zhì)的合成。灌服亮氨酸或者葡萄糖對緩解糖皮質(zhì)激素的作用不明顯。試驗(yàn)二29日齡體重相近的AA雄性肉仔雞隨機(jī)分為兩個(gè)組，分別飼喂亮氨酸日糧(1％)和丙氨酸日糧(0.68％)，同時(shí)每個(gè)組早晚各分別注射DEX和相同體積的生理鹽水，飼喂和注射4天，32日齡20:0

4、0空腹12h后采血采樣，再飼喂3h后采血采樣，結(jié)果表明，糖皮質(zhì)激素可抑制骨骼肌發(fā)育，降低生產(chǎn)性能，可通過AMPK和mTOR信號(hào)通路來影響胸肌蛋白質(zhì)的合成，并且飼喂亮氨酸日糧對蛋白質(zhì)合成的抑制作用有一定的緩解效應(yīng)。試驗(yàn)三34日齡體重相近的AA雄性肉仔雞隨機(jī)分為兩個(gè)組，分別飼喂高能日糧(3612MJ/Kg)和基礎(chǔ)日糧(3112MJ/Kg)，同時(shí)每個(gè)組早晚各分別注射DEX和相同體積的生理鹽水，飼喂和注射4天，37日齡20:00空腹12h后采血

5、采樣，再飼喂3h后采血采樣，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空腹處理12h后，在飼喂高能日糧條件下，糖皮質(zhì)激素處理激活了AMPKα2Thr172、mTORSer2448和p70S6KThr389位點(diǎn)的磷酸化水平；在飼喂正常能量日糧條件下，糖皮質(zhì)激素處理激活了mTORSer2448位點(diǎn)的磷酸化水平，抑制了p70S6KThr389和AktSer473位點(diǎn)的磷酸化水平?？崭?2h再飼喂3h處理后，在飼喂高能日糧條件下，糖皮質(zhì)激素處理顯著的抑制了mTORSer244

6、8和p70S6KThr389位點(diǎn)的磷酸化水平；在飼喂正常能量日糧條件下，糖皮質(zhì)激素處理顯著的抑制了mTORSer2448位點(diǎn)的磷酸化水平，顯著的激活了AMPKα2Thr172和p70S6KThr389位點(diǎn)的磷酸化水平。結(jié)果表明，糖皮質(zhì)激素可通過AMPK和mTOR信號(hào)通路來影響胸肌蛋白質(zhì)的合成，糖皮質(zhì)激素一方面可能通過mTOR來影響p70S6K，另一方面也可能不通過mTOR，而通過其它路徑來影響p70S6K。
　　 利用體外培養(yǎng)成

7、肌細(xì)胞，開展了三個(gè)體外試驗(yàn)：試驗(yàn)四可分為：對照組，DEX(40nM)組，DEX和PI3K抑制劑(10μMLY294002)共同處理，DEX和Akt抑制劑(10μMAktinhibitor)共同處理組，DEX和mTOR抑制劑(25μMRapamycin)共同處理，處理3h后發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素處理顯著的抑制了GR、mTOR、S6K1、AMPKα2、Akt1的mRNA表達(dá)；糖皮質(zhì)激素和PI3K/Akt抑制劑共同處理可顯著的降低Akt1、S6K1

8、和AMPKα2的mRNA表達(dá)，可使mTOR的mRNA表達(dá)顯著降低或有下降趨勢。試驗(yàn)五可分為：對照組，DEX(1μM)組，DEX和糖皮質(zhì)激素受體抑制劑(100nMRU486)共同處理，DEX和mTOR抑制劑(25μMRapamycin)共同處理，處理3h后發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素處理顯著的激活了AMPKαThr172、mTORSer2448位點(diǎn)的磷酸化水平；糖皮質(zhì)激素和RU486共同處理顯著地抑制了mTORSer2448位點(diǎn)的磷酸化水平，顯著的激

9、活了p70S6KThr389位點(diǎn)的磷酸化水平，糖皮質(zhì)激素和Rapamycin共同處理顯著的抑制了mTORSer2448位點(diǎn)的磷酸化水平，顯著的激活了p70S6KThr389位點(diǎn)的磷酸化水平。試驗(yàn)四、五結(jié)果表明，糖皮質(zhì)激素通過糖皮質(zhì)激素受體作用于調(diào)控蛋白質(zhì)合成的通路，AMPK及mTOR信號(hào)通路可能參與了糖皮質(zhì)激素對蛋白質(zhì)合成的調(diào)控過程，可能依賴于Akt，另外，糖皮質(zhì)激素一方面可能通過mTOR來影響p70S6K，另一方面也可能不通過mTOR

10、，而通過其它路徑來影響p70S6K。試驗(yàn)六培養(yǎng)雞成肌細(xì)胞，分為對照組，DEX(1μM)組，支鏈氨基酸組(10mMBCAAleu：Ile：Val=2:1:1.2)，DEX和支鏈氨基酸共同處理組，分別處理0.5h，1h，3h，12h，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素和BCAA對蛋白質(zhì)合成通路的影響可能存在時(shí)間效應(yīng)，在處理3h對，糖皮質(zhì)激素處理顯著降低了S6K1的mRNA表達(dá)水平，AMPKα2的mRNA表達(dá)水平有下降趨勢；在處理1h時(shí)，BCAA處理對AMP