毛木耳油疤病病菌致病因子產(chǎn)生條件與基本特性研究.pdf

1、毛木耳（Auricularia polytricha）是一種具有重要營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能的食用真菌，在我國(guó)四川、福建等地廣泛栽培。毛木耳油疤病是由子囊菌木棲柱孢霉（Scytalidium lignicola）引起的一種菌絲體侵染性病害。在前期研究中首次發(fā)現(xiàn)木棲柱孢霉對(duì)毛木耳菌絲體具有較強(qiáng)的寄主專一性。為探索木棲柱孢霉專一性侵染毛木耳菌絲體的致病機(jī)制，本文分析了木棲柱孢霉在不同培養(yǎng)基質(zhì)上對(duì)毛木耳菌絲體的致病性、木棲柱孢霉酶類致病因子的初步探

2、索以及毒素類致病因子的產(chǎn)生條件與基本特性，并對(duì)毒素類致病因子的分離純化方法進(jìn)行了摸索。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴研究了毛木耳油疤病在不同培養(yǎng)條件下的癥狀表現(xiàn)。在裝滿培養(yǎng)料的菌袋兩端分別接種毛木耳和木棲柱孢霉菌絲，菌袋中的毛木耳菌絲會(huì)被木棲柱孢霉感染而出現(xiàn)油疤病病斑。而在木屑平板培養(yǎng)料上，當(dāng)兩者接觸后，培養(yǎng)皿的正面和背面均未出現(xiàn)油疤病病斑，但接觸后的毛木耳菌絲出現(xiàn)變色發(fā)黃的癥狀;在雙頭試管培養(yǎng)料中，能觀察到兩者的接觸部分出現(xiàn)油疤病

3、病斑;在三角瓶培養(yǎng)料中，當(dāng)兩者接觸后，貼三角瓶壁的部分能觀察到油疤病病斑，三角瓶上面部分則僅出現(xiàn)菌絲變色發(fā)黃的癥狀。⑵研究了病原菌培養(yǎng)液對(duì)毛木耳及其它食用菌的抑制作用。隨著培養(yǎng)基中木棲柱孢霉?jié)饪s培養(yǎng)液量的增加，對(duì)毛木耳菌絲體的抑制作用增強(qiáng)，當(dāng)添加量為總體積的50％時(shí)，能完全抑制毛木耳菌絲的生長(zhǎng)。同時(shí)，其對(duì)平菇、香菇、黑木耳、秀珍菇的菌絲體也有較強(qiáng)的抑制能力，對(duì)其它食用菌菌絲體的生長(zhǎng)抑制能力則較弱，對(duì)猴頭菇菌絲體的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。⑶病原菌

4、蛋白質(zhì)類致病因子分析。病斑處和病原菌菌絲生長(zhǎng)部位的水提取液對(duì)毛木耳菌絲生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且水提取液滅菌后失去抑菌活性。⑷病原菌毒素類致病因子分析。在液體培養(yǎng)條件下，CYM培養(yǎng)液中致病因子產(chǎn)量最高，最佳培養(yǎng)時(shí)間是8天，需持續(xù)振蕩，在初始pH4～9范圍內(nèi)致病因子的產(chǎn)生不受pH值變化的影響，最佳碳源和氮源分別為葡萄糖和蛋白胨。致病因子的活性不受蛋白酶K的影響，具有較強(qiáng)的紫外光穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性，在pH2～10范圍內(nèi)活性不受pH值變化的影響

5、，此外，致病因子的分子量小于1000、在氯仿中溶解性最好，推測(cè)致病因子中包括毒素類物質(zhì)。⑸使用葡聚糖凝膠柱層析、陰離子交換樹脂、陽(yáng)離子交換樹脂和硅膠柱層析分離毒素，均未能將毒素較好地分離開。將木棲柱孢霉毒素培養(yǎng)液的氯仿萃取物經(jīng)過(guò)制備板薄層層析分離，得到活性組分的存在部位，繼續(xù)通過(guò)制備板薄層層析分離，得到的再分離物中Rf=0和Rf=0.08條帶處的組分對(duì)毛木耳生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，分別達(dá)到69.8％和63.5％。通過(guò)HPLC檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Rf=