毛木耳種質資源研究.pdf

1、毛木耳(AuriculariapolytrichaSacc)食、藥兼用，屬真菌門(Eumycota)，擔子菌亞門(Basidiomycotina)，異擔子菌綱(Heterobasidiomycetes),木耳目(Auriculariales)，木耳科(Auriculariaceae)，木耳屬(Auricularia)，是我國主要栽培食用菌之一，其栽培菌株耳片肥厚，柔軟可口，清脆鮮美，營養(yǎng)豐富，藥用性平，味甘，有益氣強身，活血，止血之功效

2、。由于生態(tài)環(huán)境日益惡化，野生毛木耳越來越少，人工栽培行業(yè)管理混亂，使得毛木耳品種退化現(xiàn)象日益加重，病蟲害滋生極其普遍。因此，對毛木耳種質資源進行收集與保存以及研究與利用具有重要意義。本文從同工酶以及分子水平對毛木耳種質資源進行了評價，并對供試菌株生產性能以及毛木耳在重金屬銅的吸收條件方面作了研究。主要結果如下： 1.采用垂直平板聚丙烯酰胺凝膠電泳技術對毛木耳56個菌株酯酶同工酶的酶譜多樣性進行了分析。結果表明，供試菌株有一定的遺

3、傳變異，檢測到遷移率不同的10條酶帶，各菌株分別具有1～6條酶帶，共有26種酶譜類型。菌株被分成了8大群：第一群包括黃耳zh等34個菌株；第二群包括白背木耳等8個菌株；第三、第四群分別為黑木耳和915兩個單獨的菌株；第五群為99等4個菌株；第六群包括43等4個菌株；第七群包括50385和AP067兩個菌株；第八群包括小上3和雜交34兩個菌株。說明酯酶同工酶分析技術是鑒別種及品種以下菌株的有效手段。 2.用22個隨機引物對來源不同

4、的56個木耳菌株進行了RAPD分析。結果表明，所有引物的擴增產物DNA片斷均表現(xiàn)出明顯的多態(tài)性，供試菌株總共擴增出164條多態(tài)性片段，占總擴增片段的99％；供試菌株兩兩間遺傳相似系數(shù)變化較大(平均GS值0.2143～0.8764)。采用系統(tǒng)聚類法中的類平均法，對供試菌株兩兩間的相似系數(shù)進行聚類，可將其分為四大類，各大類的類間和類內菌株的遺傳變異程度較大，以Ⅳ類內各菌株間的最高(平均GS值0.3891)，Ⅱ和Ⅲ類間的最低(平均GS值0.5

5、887)，表明遺傳變異也較豐富(總平均GS值0.4918)。將RAPD技術應用于不同菌株間遺傳差異的研究，具有反應迅速、不受外界環(huán)境條件影響、能從DNA分子水平上揭示菌株間遺傳差異等優(yōu)點。是一種快速準確評估木耳種質資源的有效方法。 3.采用ISSR技術對55個木耳菌株進行了檢測與分析。從27條ISSR引物中篩選出適合毛木耳種質分析的17條ISSR引物。17條引物共擴增出155條帶，多態(tài)性位點155；多態(tài)性位點比率100％?；跀U

6、增條帶數(shù)據(jù)庫建立了Jaccard遺傳相似系數(shù)矩陣，構建了相關的分子樹狀圖，將55個供試菌株分為5類群：Ⅰ類群含12個菌株，Ⅱ類群含11個菌株，Ⅲ類群含2個菌株，Ⅳ類群含24個菌株，Ⅴ類群含6個菌株。55個菌株的平均遺傳相似系數(shù)為0.4109，菌株間的遺傳多樣性十分豐富。ISSR能檢測到比RAPD更多的遺傳變異，ISSR標記是一種多態(tài)性和重復性優(yōu)于RAPD標記的技術。 4.對毛木耳7個菌株rRNA基因內轉錄間區(qū)(ITS)進行了克隆

7、測序，并將其與木耳屬其它幾個種的相應序列進行了比較。結果表明，在供試的7個毛木耳菌株中，除特大(209bp)外，其余6個菌株的ITS2區(qū)序列長度完全相同，毛木耳rRNA基因的兩個ITS區(qū)序列有一定數(shù)量的堿基變異，整個ITS區(qū)共有11個變異位點。與下載的木耳屬另外4個種相比較，均有較大程度的變異，提示毛木耳rRNA基因的ITS區(qū)序列并不絕對保守。根據(jù)遺傳同源性分析、遺傳距離分析和系統(tǒng)樹上所顯示的供試菌株及相關已知種的親緣關系，ITS序列分

8、析支持傳統(tǒng)的依據(jù)形態(tài)學進行的木耳屬分類。 5.對57個菌株進行了出菇試驗，比較了它們的形態(tài)特征，出菇期早晚，產量情況。方差分析結果表明，57個菌株間產量差異顯著。其中，大光、035、黃耳zh、上海1號、雜交1號、915、特大、川7、913、紅大耳、雜交34、3039、黃10、AP7、AP6、719、ml、951、特大A系、781和臺耳319等21個菌株的產量高、菇形好、耳片厚而大，可以作為四川省推廣栽培的菌株應用于生產。

9、 6.對毛木耳生物吸附Cu2+的情況進行了研究，評價了影響吸附的溶液pH值，溫度，振蕩吸附時間，金屬初始濃度和菌絲體濃度。結果表明，pH值影響毛木耳的吸附能力隨溶液中初始Cu2+濃度的不同而不同；溫度的影響沒有明顯規(guī)律，以20℃時吸附能力最強；吸收15min時，毛木耳對Cu2+的吸附值達最高(1.379mgCu2+/g干菌絲粉)；隨著溶液初始Cu2+濃度的增加，吸附率增加，但隨菌絲體生物量的增加吸附能力下降，當溶液Cu2+為60mg/L