竹子PeD14基因克隆和內(nèi)源獨(dú)腳金內(nèi)酯檢測(cè)方法研究.pdf

1、竹子從屬于禾本科（Gramineae)竹亞科（Bambusoideae)，是典型的無性系繁殖植物類群，靠竹株基部芽眼(叢生竹)或延伸生長(zhǎng)的地下莖側(cè)芽(散生竹)進(jìn)行更新生長(zhǎng)。竹子地下莖側(cè)芽的萌發(fā)和生長(zhǎng)受到包括養(yǎng)分、激素在內(nèi)的許多因素影響和調(diào)控，其中可溶性糖和氮磷元素是養(yǎng)分中重要部分，而獨(dú)腳金內(nèi)酯（strigolactones，SLs)是新近發(fā)現(xiàn)的具有抑制植物側(cè)枝生長(zhǎng)發(fā)育活性的一類植物激素，可能參與竹筍萌發(fā)的調(diào)控。
　　本研究監(jiān)測(cè)毛竹

2、竹鞭及竹葉季節(jié)性養(yǎng)分變化，探討竹子地下莖側(cè)芽萌發(fā)與生長(zhǎng)對(duì)養(yǎng)分的需求特征；利用外源獨(dú)腳金內(nèi)酯類似物處理竹子幼苗，研究竹子對(duì)SLs響應(yīng)；在毛竹中克隆到一個(gè)獨(dú)腳金內(nèi)酯受體蛋白基因D14的同源基因PeD14，分析了其基因結(jié)構(gòu)和組織表達(dá)特性；最后用超高效液相色譜（UPLC)方法測(cè)定竹子內(nèi)源5-脫氧獨(dú)腳金醇，初步建立了竹子中獨(dú)腳金內(nèi)酯的檢測(cè)方法，取得主要研究結(jié)果如下：
　　1.毛竹竹葉和竹鞭的可溶性糖含量在7月和10月均較低，1月竹葉和竹鞭的

3、可溶性糖含量大幅增加，增幅達(dá)103.6％和52.8%，4月竹葉和竹鞭的可溶性糖含量稍微下降。竹葉和竹鞭中氮磷含量變化趨勢(shì)相近，10月下降，1月稍微上升，4月又回落，除竹鞭中的磷含量變化較大外，竹葉和竹鞭的氮磷含量變化幅度相對(duì)平緩；
　　2.外源GR24(5μM)處理綠竹（Bambusa oldhami)幼苗發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，2周和4周時(shí)處理組芽平均增值數(shù)減少了95.83%和78.43%；
　　3.通過通過同源克隆擴(kuò)增得到毛

4、竹（Phyllostachys edulis)PeD14 cDNA全長(zhǎng)918bp序列，基因結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)內(nèi)含子，編碼305個(gè)氨基酸。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析PeD14基因在不同部位的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，PeD14基因在芽中表達(dá)最高，鞭最少；
　　4. PeD14擁有一個(gè)由7個(gè)β-片層組成的核心，被大約7個(gè)主要的α-螺旋圍繞，其頂部是由4個(gè)α-螺旋組成的頂蓋，頂蓋下是一個(gè)大的疏水空腔，其中催化三聯(lián)體在的位置為Ser134、Asp255和Hi

5、s284。毛竹PeD14基因編碼的氨基酸與單子葉植物相似度>87%，與雙子葉植物的D14蛋白的相似度>60%，單子葉植物在N-端比雙子葉植物多34-50個(gè)不等氨基酸；
　　5.應(yīng)用超高效液相色譜法分離檢測(cè)5-DS發(fā)現(xiàn)其最大吸收峰在237 nm，但該波長(zhǎng)下目標(biāo)峰的峰形展寬比較嚴(yán)重，基線發(fā)生漂移，250 nm下基線、峰形均較好，適合作為檢測(cè)波長(zhǎng)，甲醇作為流動(dòng)相基線較乙腈更穩(wěn)定，甲醇中添加0.25%的甲酸能改善峰形，乙酸乙酯作提取劑，利