三種蚜傳病毒外殼蛋白葉綠體離體跨膜運(yùn)輸研究.pdf

1、蕪菁花葉病毒(Turnipmosaicvirus，TuMV)、大豆花葉病毒(Soybeanmosaicvirus，SMV)和甘蔗花葉病毒(Sugarcanemosaicvirus，SCMV)均為世界性分布病毒，屬于馬鈴薯Y病毒組(PotatovirusYgroup)，在自然條件下主要靠蚜蟲(chóng)以非持久性方式傳播，分別是危害十字花科蔬菜、豆科作物和禾本科植物的主要病毒。
　　 本文利用RT-PCR、序列測(cè)定及分析的方法對(duì)采自南京、洪澤

2、、姜堰自然發(fā)生的具有典型癥狀的青菜、大豆和玉米病樣進(jìn)行鑒定，南京地區(qū)青菜病樣分離物NJ-TuMV-CP核苷酸序列與國(guó)內(nèi)外報(bào)道的TuMV不同地區(qū)的病原分離物相比較，與印度、河北和北京地區(qū)病原分離物的同源性較低，與其他地區(qū)TuMV病原分離物同源性均在90％以上，洪澤地區(qū)大豆病樣分離物HZ-SMV-CP核苷酸序列與國(guó)內(nèi)外報(bào)道的SMV不同地區(qū)的病原分離物相比較，與中國(guó)的SMV-BZ病原分離物序列同源性較低，與SMV其他地區(qū)病原分離物核苷酸序列的

3、同源性均在90％以上，姜堰地區(qū)玉米病樣分離物分別擴(kuò)增到其JY-SCMV-CP、JY-HC-Pro、JY-Vpg和JY-Nib四個(gè)基因，并分別與與國(guó)內(nèi)外報(bào)道的SCMV不同地區(qū)的病原分離物相比較，姜堰地區(qū)玉米病樣分離物各基因的核苷酸序列MDMV、SrMV和JGMV對(duì)應(yīng)的序列同源性較低，且SCMV-CP基因與泰國(guó)和美國(guó)的病原分離物的同源性較低，其余各基因與GenBank中已經(jīng)登錄的SCMV不同地區(qū)病原分離物的CP、HC-Pro、Vpg和NIb

4、基因的同源性均在90％以上，證實(shí)分別為T(mén)uMV、SMV和SCMV侵染。并提純病毒，得到TuMV、SMV和SCMV的濃度分別為:13.7mg/mL、11.68mg/mL和2.51mg/mL，病毒紫外掃描呈典型病毒核蛋白吸收峰，A260/A280值分別為1.17，1.30和1.15。利用提純的三種病毒分別制備了3株抗血清Tu(11)、S21和SC31，效價(jià)各為1:512000，1:204800和1:25600。
　　 根據(jù)Baner

5、jee等的方法，本研究建立了TuMV、SMV和SCMV的外殼蛋白葉綠體離體跨膜運(yùn)輸體系，分別研究了跨膜時(shí)間、外殼蛋白濃度對(duì)跨膜運(yùn)輸效率的影響以及CP跨膜的種屬選擇性。結(jié)果表明，TuMV-CP、SMV-CP和SCMV-CP分別可以快速地進(jìn)入離體的青菜、大豆和玉米葉綠體中，三種病毒外殼蛋白的跨膜時(shí)間均不低于5min，跨膜時(shí)間超過(guò)15min對(duì)進(jìn)入葉綠體中CP的濃度沒(méi)有影響;加入跨膜體系中的外殼蛋白濃度與跨膜后進(jìn)入葉綠體的外殼蛋白濃度呈正相關(guān)。

6、
　　 參照本實(shí)驗(yàn)室對(duì)TMV-CP以及兩種麥類(lèi)土傳花葉病毒CWMV-CP和BaYMV-CP的葉綠體離體跨膜運(yùn)輸結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)孵育時(shí)間對(duì)葉綠體跨膜效率的影響是相同的，即超過(guò)15min，跨膜時(shí)間對(duì)進(jìn)入葉綠體中CP的量沒(méi)有影響;加入跨膜體系中的CP濃度與跨膜后進(jìn)入葉綠體的CP量呈正相關(guān)，3種病毒能夠?qū)崿F(xiàn)跨膜的外殼蛋白最低濃度分別為54.80μg/mL，49.05μg/mL和50.20μg/mL。此研究結(jié)果為探索此類(lèi)病毒的致病機(jī)制提供理