侵染杜梨和豆梨的三種病毒種傳及分子特性分析.pdf

1、蘋果莖溝病毒（Apple stem grooving virus，ASGV）、蘋果褪綠葉斑病毒(Applechlorotic leaf spot virus，ACLSV)和蘋果莖痘病毒(Apple stem pitting virus，ASPV)在自然條件下主要通過帶病毒苗木和無性繁殖材料傳播，有報(bào)道ASGV可通過百合、昆諾藜和蘋果的種子進(jìn)行傳播。近期，本研究實(shí)驗(yàn)室采用RT-PCR技術(shù)，從砧木用杜梨實(shí)生苗中檢測到三種病毒，杜梨和豆梨是我

2、國常用砧木資源，為明確這三種病毒是否通過杜梨和豆梨種子傳播，本研究采用巢式-多重RT-PCR(nested-multiplexRT-PCR，nmRT-PCR)分析了三種病毒的種傳效率，并對病毒的序列進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1、分別從山東、山西、甘肅和湖北選取31株杜梨結(jié)果樹樣品及從湖北選取3株豆梨結(jié)果樹樣品，nmRT-PCR檢測三種病毒的結(jié)果顯示，ASGV、ACLSV和ASPV的平均檢出率分別為79.4％、8.8％和32

3、.4％。從葉、韌皮部、花、花瓣和花粉等部位均可檢測到病毒，但不同部位的檢測效果存在一定差異。
　　2、選取帶有病毒的8株杜梨和2株豆梨采集其種子，采用nmRT-PCR檢測病毒的結(jié)果表明，不同來源的種子中ASGV、ACLSV和ASPV的種子帶病毒率分別為3.3％～73.9％、2.2％～40.4％和2.2％～21.2％。對來源于2株杜梨和2株豆梨的種子播種，于6～8葉期采用nmRT-PCR進(jìn)行病毒的檢測發(fā)現(xiàn)，三種病毒可以通過種子傳播來

4、源于不同植株ASGV的種傳率存在較大差異，為2.2％～19.7％，ACLSV的種傳率是15.6％，ASPV的種傳率為2.2％～3％。由此結(jié)果可知，種子的帶毒率要高于種子傳毒率。
　　3、從山東、湖北隨機(jī)采集821份杜梨實(shí)生苗樣品和從云南采集9份川梨實(shí)生苗樣品，nmRT-PCR檢測的結(jié)果顯示，ASGV、ACLSV和ASPV的平均檢出率分別為10.1％、5.3％和3.5％。除ASPV外，另外兩種病毒的檢出率接近或低于帶病毒植株的種傳率

5、。
　　4、測定了來源于杜梨和豆梨的24個(gè)ASGV分離物的CP基因以及11個(gè)MP基因序列，這些分離物的CP基因核苷酸和氨基酸序列相似性分別為87.3％～100％和94.1％～100％，MP基因核苷酸和氨基酸序列相似性分別為84％～99.9％和94.4％～100％。系統(tǒng)進(jìn)化分析的結(jié)果顯示，來源于杜梨、豆梨及其他寄主的ASGV分子變異與其寄主來源無明顯相關(guān)性。來源于同一結(jié)果樹、種子及種子播種后的實(shí)生苗ASGV CP和MP基因序列存在差

6、異，系統(tǒng)進(jìn)化樹中，聚在不同的組群。
　　5、獲得的杜梨和豆梨11個(gè)ACLSV分離物CP基因核苷酸與氨基酸序列相似性分別為88.8％～100％和93.8％～100％。系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系的分析及序列多重比對，結(jié)果顯示，本研究獲得的所有分離物聚在同一組群中;來源于我國杜梨和豆梨的分離物存在S73-S79-D82-G98氨基酸保守序列。
　　6、測定了來源于杜梨和豆梨的9個(gè)ASPV分離物CP基因序列，這些分離物具有高度的分子變異，核苷酸和

7、氨基酸序列相似性分別為65.3％～99.8％和70.2％～99.7％。7個(gè)杜梨分離物MP基因核苷酸序列相似性為75.3％～99.6％，3個(gè)TGB基因氨基酸序列相似性分別為86.5％～100％、72.5％～100％和67.1％～100％。氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析結(jié)果說明，來源豆梨種子和杜梨的ASPV分離物CP和MP基因的分子變異與寄主無明顯相關(guān)性，其他寄主分離物CP基因的分子變異與寄主有一定的相關(guān)性。來源于同一分離物CP基因存在分子變