廣西豬瘟病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及單克隆抗體的制備.pdf

1、本研究采集CSFV疑似樣品并利用巢氏RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，從檢測(cè)CSFV核酸陽(yáng)性樣品中挑選有代表性的進(jìn)行E2基因克隆。將獲得的序列與在genebank登錄的其它廣西CSFV E2基因序列進(jìn)行綜合分析，全面了解廣西CSFV流行及遺傳變異情況。
　　 從結(jié)果中發(fā)現(xiàn)廣西流行毒株與HCLV疫苗株氨基酸與核苷酸同源性均隨著時(shí)間推移發(fā)生變化，核苷酸、氨基酸最高均下降了3.7%。通過(guò)構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn)，廣西流行毒株屬于2個(gè)基因群，4個(gè)基因亞型

2、，即1.1和2.1、2.2、2.3亞群，基因2.1亞型毒株已成為流行的優(yōu)勢(shì)毒株，未見(jiàn)基因1.2亞型及基因3群毒株。再通過(guò)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)保育豬發(fā)病仍然占第一位，但哺乳仔豬發(fā)病率呈上升的趨勢(shì)，由過(guò)去的18.42%提高到32.39%。以SHIMEN株為代表的1.1亞型毒株仍然存在廣西豬群中，主要引起母豬繁殖障礙和隱性感染，新生仔豬發(fā)病為主，基因2.1型毒株主要引起保育豬發(fā)病。本研究通過(guò)CSFV分子流行病學(xué)調(diào)查，掌握廣西近年來(lái)豬瘟病毒的流行情況，

3、為制定廣西豬瘟的防控措施提供依據(jù)。
　　 此外，將本實(shí)驗(yàn)室保存的豬瘟病毒經(jīng)純化后免疫BALB/c小鼠，通過(guò)單克隆抗體技術(shù)制備了兩株長(zhǎng)期穩(wěn)定分泌抗豬瘟病毒的單抗，分別命名為CSFV7和CSFV14。對(duì)單抗進(jìn)行鑒定后發(fā)現(xiàn)，CSFV7和CSFV14雜交瘤培養(yǎng)上清效價(jià)為1:256，腹水上清效價(jià)達(dá)1:106；抗體亞類(lèi)為IgG2b；相對(duì)親和指數(shù)分別為1.5mol/L、1mol/L，表明具有較好的親和力；單抗Western-blot與IFA反