輪狀病毒單克隆抗體的制備.pdf

1、輪狀病毒是引發(fā)全世界兒童嚴(yán)重腹瀉的重要因素，該病毒引發(fā)的感染不僅嚴(yán)重影響嬰幼兒的健康及生存質(zhì)量，還給家庭及社會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，由此可見，輪狀病毒感染已經(jīng)在世界范圍內(nèi)成為一項(xiàng)亟待解決的重要公共衛(wèi)生問題。目前尚沒有治療輪狀病毒感染的特效藥，因此，研究一種快速并準(zhǔn)確的輪狀病毒早期檢測方法，對于該病毒的防治具有深遠(yuǎn)的意義。單克隆抗體具有特異性強(qiáng)，靈敏度高的特點(diǎn)，如果將其應(yīng)用于輪狀病毒檢測方法，則可對輪狀病毒感染患者進(jìn)行及時(shí)的診斷。本課題致力

2、于制備抗輪狀病毒的單克隆抗體，為建立一種高效的輪狀病毒診斷檢測方法提供基本依據(jù)。
　　論文的第一章介紹了與輪狀病毒相關(guān)的基礎(chǔ)知識(shí)，包括病毒的形狀及生物學(xué)特性，還綜述了近年來輪狀病毒的常見檢測手段，并且根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)總結(jié)陳述了單克隆抗體制備過程中的影響因素。由于單克隆抗體的制備實(shí)驗(yàn)周期較長，實(shí)驗(yàn)步驟較多，一旦出現(xiàn)問題，會(huì)直接影響最終的結(jié)果，因此這一部分還列舉了實(shí)驗(yàn)各個(gè)環(huán)節(jié)的注意事項(xiàng)，以避免相關(guān)人員在研究過程中出現(xiàn)較多問題。<

3、br>　　論文第二章通過考察各個(gè)環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)條件，包括抗原、血清的稀釋倍數(shù)，封閉液的選擇、封閉條件的確定，酶標(biāo)二抗的包被時(shí)間以及底物液的顯色時(shí)間。建立了一種針對輪狀病毒蛋白質(zhì)的ELISA檢測方法，便于在單克隆抗體的制備過程中進(jìn)行相關(guān)抗體的檢測。
　　論文第三章介紹了通過細(xì)胞融合獲得單克隆雜交瘤細(xì)胞的過程，包括小鼠的免疫、細(xì)胞融合、陽性雜交瘤的篩選和培養(yǎng)以及單克隆雜交瘤的獲得。本課題最終得到了五株能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株：