豬瘟病毒E2蛋白主要抗原區(qū)的表達及其單克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文利用TRIzol試劑提取豬瘟病毒兔化弱毒疫苗(C株)的基因組RNA，經反轉錄獲取其cDNA，再以cDNA為模板，擴增編碼E2蛋白主要抗原區(qū)的DNA片段(378bp)，再將擴增產物正確插入到原核表達載體pPROEX-HTb中，得到重組質粒pPROEX-tE2，然后以其轉化大腸桿菌DH5α，經IPTG誘導，高效表達出了帶有組氨酸標簽的截短的重組蛋白(tE2)，占細菌總蛋白的35％。經Westernblotting分析和間接ELISA檢測

2、，該重組蛋白能被豬瘟病毒抗血清所識別。 用IPTG大量誘導重組質粒pPROEX-tE2轉化菌后，通過親和層析柱純化重組蛋白tE2，以純化的tE2蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠，然后取抗體轉陽免疫小鼠的脾淋巴細胞，以PEG與SP2/0骨髓瘤細胞融合，經過3～5輪的篩選和純化，最終獲得一株能穩(wěn)定分泌抗CSFVE2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株。經鑒定，該株單克隆抗體能夠與CSFVC株和石門株特異性結合，且識別CSFVE2蛋白上的一個

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