豬瘟病毒E2蛋白主要抗原區(qū)的表達(dá)及其單克隆抗體的制備.pdf

1、本文利用TRIzol試劑提取豬瘟病毒兔化弱毒疫苗(C株)的基因組RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲取其cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增編碼E2蛋白主要抗原區(qū)的DNA片段(378bp)，再將擴(kuò)增產(chǎn)物正確插入到原核表達(dá)載體pPROEX-HTb中，得到重組質(zhì)粒pPROEX-tE2，然后以其轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，高效表達(dá)出了帶有組氨酸標(biāo)簽的截短的重組蛋白(tE2)，占細(xì)菌總蛋白的35％。經(jīng)Westernblotting分析和間接ELISA檢測(cè)

2、，該重組蛋白能被豬瘟病毒抗血清所識(shí)別。 用IPTG大量誘導(dǎo)重組質(zhì)粒pPROEX-tE2轉(zhuǎn)化菌后，通過(guò)親和層析柱純化重組蛋白tE2，以純化的tE2蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠，然后取抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞，以PEG與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過(guò)3～5輪的篩選和純化，最終獲得一株能穩(wěn)定分泌抗CSFVE2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。經(jīng)鑒定，該株單克隆抗體能夠與CSFVC株和石門株特異性結(jié)合，且識(shí)別CSFVE2蛋白上的一個(gè)