鵝SCD1基因的遺傳變異及其組織表達(dá)規(guī)律的研究.pdf

1、硬脂酰輔酶A去飽和酶(Stearoyl-CoA desaturase,SCD)1是合成單不飽和脂肪酸的限速酶,它主要催化飽和脂肪酸——硬脂酰輔酶A(C16:0)和棕櫚酰輔酶A(C18:0)在第9和10碳原子間導(dǎo)入氫鍵,分別形成單不飽和脂肪酸——油酸(C16:1)和棕櫚酸(C18:1)。本研究以原雞SCD1基因序列為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增并克隆朗德鵝SCD1基因CDS序列;以擴(kuò)增得到的朗德鵝SCD1基因的CDS序列為模板,設(shè)計(jì)多對(duì)覆蓋全CDS

2、序列的引物,對(duì)朗德鵝、獅頭鵝、四川白鵝和豁眼鵝進(jìn)行SNP分析;運(yùn)用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù),研究SCD1基因在朗德鵝各組織中的表達(dá)狀況、對(duì)照組和填肥組之間的表達(dá)水平差異、不同填飼階段的組織表達(dá)規(guī)律,以及禁食對(duì)其表達(dá)的影響。主要結(jié)果如下:
　　 1、克隆了朗德鵝SCD1基因的完整CDS序列,全長(zhǎng)1083bp,包含6個(gè)外顯子,編碼360個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)其蛋白質(zhì)分子量為40967.2Da,等電點(diǎn)為8.8,為親水性蛋白,存在4

3、個(gè)跨膜區(qū)域。預(yù)測(cè)其氨基酸二級(jí)結(jié)構(gòu)存在Alpha螺旋、延長(zhǎng)片段和無規(guī)卷曲三種結(jié)構(gòu)。與人、小鼠、牛、原雞和斑胸草雀的同源性為72％-92％。
　　 2、采用PCR-SSCP技術(shù)檢測(cè)SCD1基因的多態(tài)性,在獅頭鵝、四川白鵝和豁眼鵝的外顯子3上(外顯子3的50bp處)均發(fā)現(xiàn)了T/C堿基替換,產(chǎn)生了AA、AB和BB三種基因型,而朗德鵝此位點(diǎn)為野生型AA型,沒有發(fā)生突變。
　　 3、朗德鵝外顯子2上(外顯子2的132bp處)發(fā)生了T

4、/C堿基替換,導(dǎo)致產(chǎn)生AA、AB和BB三種基因型。三種基因型與產(chǎn)肝性能相關(guān)性不顯著(P＞0.05)。
　　 4、應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了SCD1基因在肝臟等12個(gè)組織的表達(dá)情況。SCD1基因在填肥組朗德鵝的肝臟和脂肪中的相對(duì)表達(dá)量較高達(dá)到1.0623和0.6448。其中,填肥組的肝臟、脂肪中SCD1基因的表達(dá)量是對(duì)照組的2倍。
　　 5、肝臟、脂肪、下丘腦和胸肌中SCD1基因表達(dá)量在填飼10d達(dá)到較高水平,填飼19d