山東省番茄黃化曲葉病毒和番茄抗病基因的分子鑒定.pdf

1、番茄黃化曲葉病毒(tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬（Begomovirus），該病毒主要通過煙粉虱（Bemisiatabaci）傳播。各地研究報道表明番茄黃化曲葉病毒病(tomato yellow leaf curl disease，TYLCD)已對我國各地的番茄生產(chǎn)造成嚴重危害。
　　 本實驗從山東省受番茄黃化曲葉病毒病危害的

2、10個地區(qū)采集了10份番茄感病植株葉片樣品。各地樣品經(jīng)DNA提取、PCR擴增、TA克隆、序列測定、序列同源性比對及系統(tǒng)進化分析等一系列分子實驗方法檢測，結(jié)果表明山東各地種植番茄所感染的番茄黃化曲葉病毒基因組DNA(DNA-A)為單鏈環(huán)狀DNA分子，各地番茄黃化曲葉病毒分離物全長序列均包括2781個核苷酸，共編碼6個開放式閱讀框(ORF)，各地序列間同源性在98.53％以上。系統(tǒng)進化樹分析表明山東各地病毒分離物之間序列同源性雖然非常高，但

3、是仍可以分為兩個類群。將山東各地病毒分離物基因組全長序列在GeneBank上經(jīng)nucleotide blast比對后分析發(fā)現(xiàn)與我國上海、江蘇、安徽等地報道的番茄黃化曲葉病毒序列同源性在98.0％以上。系統(tǒng)進化樹分析表明山東地區(qū)番茄黃化曲葉病毒分離物屬于以色列番茄黃化曲葉病毒(TYLCV-ISR)株系。
　　 利用雙生病毒衛(wèi)星DNA特異性擴增引物，對山東各地所采集病毒分離物樣品的衛(wèi)星DNA(DNAβ)進行PCR擴增實驗，結(jié)果表明山

4、東各地番茄黃化曲葉病毒分離物均為單組份DNA，并不合有DNAβ。
　　 搜集了4份已用于生產(chǎn)的抗番茄黃化曲葉病毒病番茄材料，利用已報道的分子標記技術(shù)，合成了3對特異性引物，分別對與抗番茄黃化曲葉病毒病相關(guān)的Ty-1，Ty-2和Ty-3基因進行了PCR擴增篩選，根據(jù)擴增出的不同特異性條帶大小及數(shù)量，可快速鑒定番茄材料所具有的基因型（Ty-1/Ty-1，Ty-1/ty-1，ty-1/ty-1，Ty-2/Ty-2，Ty-2/ty-2，