豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究姓名：華利忠申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)指導(dǎo)教師：張書霞201012豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究法)，血清細(xì)胞色素C(ELISA法)濃度的檢測；取肺臟、心臟、肝臟、腎臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)等，觀察肉眼和組織病理變化結(jié)果：所有攻毒豬均出現(xiàn)病毒血疽組織病理學(xué)變化，在21d時最為嚴(yán)重，主要以出血性間質(zhì)性肺炎，淋巴組織淋巴細(xì)胞缺失

2、及巨噬細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，肝炎及腎炎為特征血清PCV2抗體及細(xì)胞色素C濃度均隨著攻毒時間的延長而顯著升高，并且兩者呈顯著正相關(guān)結(jié)論：成功復(fù)制出了豬圓環(huán)病毒病動物模型，且血清細(xì)胞色素C可以作為PCVD病程發(fā)展的重要監(jiān)測指標(biāo)在成功復(fù)制的PCVD模型上，選取病變最嚴(yán)重的兩個外周免疫器官：腹股溝淋巴結(jié)和脾臟，探討在PCV2感染過程中誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的動態(tài)變化及其主要凋亡途徑方法：取腹股溝淋巴結(jié)和脾臟，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；熒光定量RTP

3、CR檢測Fas／FasL及bcl2／baxmRNA表達量；分光光度法檢測oaspase3，caspase8和caspase9的活性：熒光分光光度法檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2濃度，孔雀綠比色滴定盒檢測Ca2ATP酶的活性，熒光定量RTPCR檢測鈣／鈣調(diào)素依賴性磷酸激酶ⅡmRNA相對表達量；放射免疫法檢測cAMP和cGMP濃度同時檢測血清中sFas／sFasL濃度的變化腹股溝淋巴結(jié)試驗結(jié)果：(1)細(xì)胞凋亡率：三個實驗組仔豬腹股溝淋巴結(jié)的細(xì)胞凋亡率均顯

4、著高于對照組(P005)，caspase9的活性變化不大(p005)(5)細(xì)胞內(nèi)【cal和c02ArP酶活性：三個攻毒組腹股溝淋巴結(jié)細(xì)胞內(nèi)[cal均顯著高于對照組(p001)，并且21d時最高；Ca2加T酶活性，21d時顯著下調(diào)(po05)；CaMKⅡmRNA表達量在整個實驗過程中變化不大(6)cAMP和cGMP含量的變化：cGMP濃度在攻毒后21d時顯著下降(po05)，而cAM])濃度變化不大，但三個攻毒組cAMP／cGMP比值均顯

5、著高于對照組(po05)脾臟試驗結(jié)果：(1)脾臟細(xì)胞凋亡率，三個實驗組均顯著高于對照組(p001)，并且14d的凋亡率最高：(2)FasLmRNA水平，在攻毒后21d顯著高于對照組(薩o05)，35d時極顯著高于對照組(p001)；FasmRNA35d時的表達量顯著低于對照組(P005)；(3)baxmR_NA的表達量，相比對照組14d時顯著下降，35d時極顯著升高(P001)，bax／bcl2比值，14d和21d時比對照組顯著下調(diào)(廬