蛋白質(zhì)-氨基酸對豬胎盤-BeWo細胞11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅱ型表達及活性的影響及其機制.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文蛋白質(zhì)氨基酸對豬胎盤BeWo細胞11β羥基類固醇脫氫酶Ⅱ型表達及活性的影響及其機制姓名：尚月麗申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：動物醫(yī)學(xué)生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙茹茜201106蛋白質(zhì)，氨基酸對豬胎盤／日州vb細胞llB羥基類固醇脫氫酶II型表達及活性的影響及其機制阻，可能與甲狀腺激素變化的性另lj差異有關(guān)胎盤表觀指標并未發(fā)生顯著變化，但是否影名胎盤功能，尤其是1lBHsD2的表達和活性，有待進一步研究2母豬妊娠期日糧蛋白對胎盤1

2、1pHSD2表達和活性的影響為了進一步研究母體低蛋白對胎盤功能的影響，選取70胚齡胎盤進行試驗RealtimeRTPCR分析了甲狀腺激素受體(TRal，TRa2，TRpl)，短型leptin受體(ObRs)，糖皮質(zhì)激素受體(GR)和llBHsD2的表達，發(fā)現(xiàn)LP組70胚齡雌性胎豬胎盤1lDHSD2mRNA表達顯著升高(PO05)，而11BHSD2蛋白含量較對照組下降35呶戶005)，11BHSD2酶活也顯著降低(PO05)雄性胎豬胎盤1

3、1口HsD2mRNA和蛋白表達沒有變化，而1lpHsD2酶活卻升高了33％(尸O05)以上結(jié)果提示：母豬妊娠期日糧蛋白限制對胎豬胎盤llBHSD2活性的影響呈性別特異性，與雌性胎豬宮內(nèi)發(fā)育受阻相關(guān)聯(lián)雄性胎豬胎盤obRsmRNA表達有下降趨勢(P=o069)，而obRs蛋白量有升高的趨勢(P=O073)不管是雄性還是雌性，胎盤GR表達均未見差異以上結(jié)果提示，leptin及其信號通路可能參與介導(dǎo)母豬妊娠期低蛋白日糧對胎豬胎盤11BHsD2表

4、達和活性的影響3氨基酸對胎盤(BeWr0)細胞11pHSD2表達及活性的影響由于在體因素比較復(fù)雜，本實驗采用人胎盤絨毛膜細胞系BeWo細胞，在正常和低氨基酸培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h，研究低氨基酸對胎盤細胞11BHsD2的影響低氨基酸培養(yǎng)Bewo細胞48h對細胞活力沒有顯著影響低氨基酸導(dǎo)致11BHSD2mRNA表達升高了12倍(P001)然而westemblot檢測到低氨基酸培養(yǎng)的細胞中11BHsD2蛋白含量降低了541％(尸O05)，11pH

5、sD2活性降低38％(尸O05)11BHsD2mRNA和蛋白水平的變化不一致，提示可能存在miRNA參與的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控利用相關(guān)的軟件預(yù)測并分析了以11BHsD2為靶的5個miRNA，發(fā)現(xiàn)低氨基酸組miRNA498表達升高了13倍(P005)以上結(jié)果提示：低氨基酸不影響B(tài)ewo細胞活力，但顯著降低胎盤細胞llBHsD2的蛋白表達和活性；miRNA498可能參與11BHsD2轉(zhuǎn)錄后調(diào)控4氨基酸影響B(tài)eWro細胞1lp—HSD2表達和活性的信號