中國(guó)部分地區(qū)豬血清對(duì)甲型H1N1流感病毒的交叉免疫研究分析.pdf

1、甲型H1N1流感病毒是一種新發(fā)生的全新“三重排”流感病毒，它在人群中的感染導(dǎo)致了全球范圍內(nèi)的傳播并造成了21世紀(jì)首次全球范圍內(nèi)的流感大流行。2009年5月至11月本次流感爆發(fā)后，全球數(shù)十個(gè)國(guó)家和地區(qū)陸續(xù)報(bào)道在豬體內(nèi)分離到甲型H1N1流感病毒，而在此次流感爆發(fā)之前，從未在豬體內(nèi)分離到該病毒。最近的研究證實(shí)甲型H1N1流感病毒可以感染豬并造成“豬-豬”的傳播。而豬作為流感病毒的中間宿主，在流感病毒的變異過(guò)程中充當(dāng)了“混合器”的作用。而且目前

2、在中國(guó)大陸地區(qū)還未有從豬體內(nèi)分離到甲型H1N1流感病毒的報(bào)道，也未知中國(guó)地區(qū)豬群對(duì)甲型H1N1流感病毒的免疫水平。因此很有必要進(jìn)行中國(guó)地區(qū)豬血清對(duì)該病毒的交叉免疫水平方面的調(diào)查和研究。
　　 為了調(diào)查中國(guó)地區(qū)豬血清對(duì)甲型H1N1流感病毒是否存在交叉免疫，我們分別建立了針對(duì)甲型H1N1流感病毒和H1N1亞型豬流感病毒目前流行株的抗體檢測(cè)方法。首先我們通過(guò)PCR分別擴(kuò)增了A/California/04/2009H1N1（甲型H1N1

3、流感病毒）和A/Swine/Shandong/1123/2008(H1N1)（H1N1亞型豬流感病毒目前流行株）的HA1基因，并克隆到表達(dá)載體pET-30a(+)上。建立兩個(gè)pET-HA1重組質(zhì)粒（甲型H1N1流感病毒和H1N1亞型豬流感病毒目前流行株），轉(zhuǎn)化宿主菌BL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)重組蛋白。通過(guò)鎳柱親和層析獲得純化的重組蛋白。然后，以重組蛋白作為檢測(cè)抗原，分別建立了檢測(cè)甲型H1N1流感病毒抗體和H1N1亞型豬流感

4、病毒目前流行株抗體的間接ELISA方法，并用該方法檢測(cè)了搜集到的785份豬血清和143份甲流患者血清。
　　 隨后我們用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS對(duì)兩種ELISA檢測(cè)結(jié)果作了相關(guān)性分析，表明H1N1亞型豬流感病毒HA1-ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果與甲型H1N1流感病毒HA1-ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果呈顯著的線性正相關(guān)。這種關(guān)系說(shuō)明豬流感病毒H1N1亞型抗體陽(yáng)性的豬血清存在對(duì)甲型H1N1流感病毒的交叉免疫反應(yīng)，而甲流患者血清中也存在對(duì)豬流感病毒