黃瓜白婁病抗性基因的分子標(biāo)記研究.pdf

1、黃瓜，世界上目前栽培最為廣泛的蔬菜之一，人民生活中最常見的一種蔬菜。黃瓜白粉?。≒odosphaeva xanthii Syn．Sphaerotheca fuliginea）是一種潛伏期短、再侵染速度快、流行性強(qiáng)的世界性黃瓜主要病害之一，特別是隨著保護(hù)地的發(fā)展，該病危害越來越嚴(yán)重，在我國南北各地的黃瓜主產(chǎn)區(qū)幾乎周年性地頻繁發(fā)生，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，也成為綠色有機(jī)生產(chǎn)的主要障礙。安全、環(huán)保和高效地控制黃瓜白粉病的根本措施就是培育出高抗白粉病

2、新品種。由于黃瓜白粉病的病原屬于專性活體寄生菌，而且發(fā)病情況受環(huán)境影響較大，導(dǎo)致田間抗性鑒定與篩選的效率低、周期長。與田間鑒定相比，分子標(biāo)記輔助篩選具有不受環(huán)境影響、早期、快速和高效的優(yōu)點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)的研究的不斷深入，對(duì)育種來言，篩選到與黃瓜白粉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記有重大意義。
　　 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，黃瓜白粉病病的研究有了新的手段和方法。
　　 我們以抗病品系“11-1-2-8-1-2-1-2(

3、M1)”和感病品系“6-1-1-1-1-1-2(M2)”及其構(gòu)建的F2代群體為基礎(chǔ)材料，利用AFLP、SRAP、兩種分子標(biāo)記方法進(jìn)行黃瓜白粉病抗病基因的分子標(biāo)記的研究，結(jié)果如下：
　　 （1）對(duì)雙親及其雜交后代抗病性鑒定結(jié)果表明，F(xiàn)2群體中有6株表現(xiàn)為抗白粉病菌、159 株表現(xiàn)為感病，41株表現(xiàn)為中間類型即中抗類型，經(jīng)適合性測驗(yàn)群體抗感分離比例基本符合1:3：12模式（χ2=3.95，P≦0.05）?？赏茰y黃瓜白粉病抗性由1對(duì)隱

4、性主基因（s）和1對(duì)顯性抑制基因（I）共同控制，并且I基因的表達(dá)受環(huán)境影響。當(dāng)I存在且處于有利于其表達(dá)的環(huán)境時(shí)，I抑制了S和s基因表達(dá)，植株表現(xiàn)為感病，感病植株基因型為S_I_和ssI_。當(dāng)I不存在時(shí)（即ii），純合隱性s基因表達(dá)完全抗病，基因型為ssii；而純合SS或雜合Ss基因表現(xiàn)出一定的抗病性，即中間類型，其基因型為S_ii。我們的這個(gè)推論與Morishita et al (2003)相一致（2）根據(jù)BSA法建立抗、感病池，利用A

5、FLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)黃瓜白粉病進(jìn)行了研究。20條EcoRI擴(kuò)增引物與18條MseI擴(kuò)增引物相互組合，共計(jì)360對(duì)AFLP引物對(duì)，對(duì)黃瓜白粉病抗病基因的AFLP標(biāo)記進(jìn)行篩選，共擴(kuò)增出了大約20000條帶。，得到了2對(duì)AFLP標(biāo)記E2(E-AAG)/M55(M-CGA)和E2(E-AAG)/M62（M-CTT）。在抗、病親本池和抗病池中都能穩(wěn)定的擴(kuò)增出差異片段，然后將2對(duì)引物進(jìn)行了40株抗感單株小群體驗(yàn)證，證明兩引物對(duì)分別在整個(gè)F2內(nèi)該標(biāo)記

6、的連鎖性差或者不連鎖，沒有測序的必要性，因此獲得的2條AFLP特異條帶未割膠回收側(cè)序。
　　 （3）應(yīng)用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)結(jié)合群分法在抗病品系“11-1-2-8-1-2-1-2(M1)”和感病品系“6-1-1-1-1-1-2(M2)”及抗病池(BR)和感病池（BS）中篩選與黃瓜白粉病緊密連鎖的分子標(biāo)記。從437對(duì)SRAP引物組合中進(jìn)行篩選，僅有62對(duì)引物組合可以在兩個(gè)親本抗感池間擴(kuò)增出穩(wěn)定的多態(tài)性條帶，占所用引物組合總數(shù)的14