黃瓜抗西瓜花葉病毒（WMV）基因的分子標記研究.pdf

1、黃瓜是我國第一大保護地栽培作物。近年來，黃瓜病毒病的發(fā)生有逐漸加重的趨勢，常造成經(jīng)濟上較為嚴重的損失。西瓜花葉病毒(WMV)自上世紀五十年代發(fā)現(xiàn)以來在世界范圍內(nèi)危害逐漸加重，也是侵染我國黃瓜的主要病毒之一，本試驗運用AFLP技術(shù)研究與黃瓜抗WMV緊密連鎖的分子標記，通過連鎖作圖將獲得的標記定位到已有的黃瓜分子遺傳圖譜上，為黃瓜抗病毒基因育種實施分子標記輔助選擇奠定理論和技術(shù)基礎。 供試黃瓜材料父本為‘秋棚’(P1)，抗WMV；母

2、本為‘歐洲八號’(P2)，感WMV；以二者為親本生產(chǎn)F1和F2，在F2代通過單粒傳法獲得120份重組自交系(RIL)群體(F6)。對親本和重組自交系群體進行了苗期抗病接種，以病情指數(shù)為指標，進行了病毒的抗病性鑒定。結(jié)果表明：抗性基因的病情指數(shù)在黃瓜RIL群體中呈雙峰分布，但峰形不對稱。結(jié)合χ2測驗結(jié)果得出黃瓜對WMV的抗性受隱性單基因控制，峰形上的差異可能由于田間調(diào)查的誤差或是存在微效基因的修飾作用而引起。 運用AFLP(擴增片

3、段長度多態(tài)性)，SCAR(特異性序列擴增)和BSA(混合分離分析法)對黃瓜抗WMV基因位點進行分子標記研究。對兩個親本及抗感基因池進行AFLP擴增篩選，在64對E+3/M+3的AFLP引物中發(fā)現(xiàn)有8對AFLP引物在親本和抗感基因池之間擴增出穩(wěn)定可重復的DNA多態(tài)性。將這8對引物在120個RIL株系中進行驗證并進行遺傳連鎖分析，結(jié)果只有引物E-ACT/M-CTT的一條多態(tài)性產(chǎn)物(E-ACT/M-CTT-427)與WMV抗性基因具有連鎖關系

4、，遺傳連鎖距離為8cM。將該AFLP標記成功轉(zhuǎn)化成了共顯性的SCAR標記。利用Jionmap3.0首次將該標記定位到已有的黃瓜遺傳圖譜上，該標記位于第Ⅱ連鎖群上。對差異片段進行了克隆測序，結(jié)果顯示抗感親本在目標片段上的長度分別為427bp和421bp，只有兩個差異堿基和6個“T”堿基的插入和缺失。分析所得到的差異片段的堿基序列后，發(fā)現(xiàn)該差異片段處于非結(jié)構(gòu)基因區(qū)，沒有完整的開放閱讀框，且有連續(xù)的“T”堿基序列，根據(jù)結(jié)構(gòu)特征推測該序列屬于經(jīng)