黃瓜抗西瓜花葉病毒（WMV）基因的分子標記研究.pdf

1、黃瓜是我國第一大保護地栽培作物。近年來，黃瓜病毒病的發(fā)生有逐漸加重的趨勢，常造成經濟上較為嚴重的損失。西瓜花葉病毒(WMV)自上世紀五十年代發(fā)現以來在世界范圍內危害逐漸加重，也是侵染我國黃瓜的主要病毒之一，本試驗運用AFLP技術研究與黃瓜抗WMV緊密連鎖的分子標記，通過連鎖作圖將獲得的標記定位到已有的黃瓜分子遺傳圖譜上，為黃瓜抗病毒基因育種實施分子標記輔助選擇奠定理論和技術基礎。 供試黃瓜材料父本為‘秋棚’(P1)，抗WMV；母

2、本為‘歐洲八號’(P2)，感WMV；以二者為親本生產F1和F2，在F2代通過單粒傳法獲得120份重組自交系(RIL)群體(F6)。對親本和重組自交系群體進行了苗期抗病接種，以病情指數為指標，進行了病毒的抗病性鑒定。結果表明：抗性基因的病情指數在黃瓜RIL群體中呈雙峰分布，但峰形不對稱。結合χ2測驗結果得出黃瓜對WMV的抗性受隱性單基因控制，峰形上的差異可能由于田間調查的誤差或是存在微效基因的修飾作用而引起。 運用AFLP(擴增片

3、段長度多態(tài)性)，SCAR(特異性序列擴增)和BSA(混合分離分析法)對黃瓜抗WMV基因位點進行分子標記研究。對兩個親本及抗感基因池進行AFLP擴增篩選，在64對E+3/M+3的AFLP引物中發(fā)現有8對AFLP引物在親本和抗感基因池之間擴增出穩(wěn)定可重復的DNA多態(tài)性。將這8對引物在120個RIL株系中進行驗證并進行遺傳連鎖分析，結果只有引物E-ACT/M-CTT的一條多態(tài)性產物(E-ACT/M-CTT-427)與WMV抗性基因具有連鎖關系

4、，遺傳連鎖距離為8cM。將該AFLP標記成功轉化成了共顯性的SCAR標記。利用Jionmap3.0首次將該標記定位到已有的黃瓜遺傳圖譜上，該標記位于第Ⅱ連鎖群上。對差異片段進行了克隆測序，結果顯示抗感親本在目標片段上的長度分別為427bp和421bp，只有兩個差異堿基和6個“T”堿基的插入和缺失。分析所得到的差異片段的堿基序列后，發(fā)現該差異片段處于非結構基因區(qū)，沒有完整的開放閱讀框，且有連續(xù)的“T”堿基序列，根據結構特征推測該序列屬于經