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1、Y93“/508單位代碼—地量5西南大學碩士學位論文黃瓜雌性控制基因的sRAP和SCAR分子標記論文作者:畢喜紅指導教師:張興國(研究員)學科專業(yè):蔬菜學研究方向:分子生物學與蔬菜遺傳育種提交論文日期:2006年5月25日論文答辯日期:2006年6月6日學位授予單位:西南大學中國重慶2006年06月西南大學碩士學位論文—■■●_曼置舅_岜童量_■—■—墨曼E蔓蔓曼II鼉■■|詈量■皇—曙皇曼■—■■■—罾基鼉置■皇■—■—■■■■■■—
2、■■—■■矗置—■皇一法(bulkedsegregantanlysis,簡稱BSA)在F2分離群體中挑選純雌株和純雄株,按濃度將14株純雌株等量混合,構建雌性DNA池:將4株純雄株與3株強雄株等量混合構建雄性DNA池。根據(jù)SRAP擴增引物的特點,設計和合成了62對SRAP擴增引物,分別對黃瓜雌性基因組DNA池和雄性基因組DNA池進行PCR擴增,經l%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增質量,其擴增結果是多條分散的帶i再經過4%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的
3、分離,進行凝膠固定、染色,顯色后,數(shù)碼照相記錄結果,觀察分析并獲得具有多態(tài)性好或能夠區(qū)分2個DNA樣品池差異的SRAP引物對。利用多態(tài)性好的SRAP引物對,對雌雄分離的F2群體進行分析,尋找與全雌性具有相似分離規(guī)律的連鎖標記。三、Sm謹標記帶的DNA片段的回收、克隆和序列分析自聚丙烯酰胺凝膠電泳板上挖取與黃瓜全雌性狀相關的SRAP差異片段,加入TE后沸水浴中提取,經PCR擴增后采用TA克隆法克隆到pMDl8T載體上,轉化XLlblue大
4、腸桿菌感受態(tài)細胞,鑒定出陽性克隆后委托上海生工生物技術服務有限公司進行雙向測序。將序列在NCBI基因庫中進行同源性比對,鑒別所屬基因。四、SRAP標記轉化為SCAR標記根據(jù)克隆的序列片段,設計和合成了用于SCAR標記的PcR引物。用此引物對全雌和全雄DNA樣品池及其構成個體進行PCR擴增,結果顯示有一條與黃瓜全雌性相關的帶。進一步在雌雄分離的F2群體中進行驗證,結果顯示該特異條帶能在全雌單株中穩(wěn)定出現(xiàn)。因此,成功將SRAP標記轉換成操作
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