球孢白僵菌對斜紋夜蛾的高毒菌株篩選及制劑研發(fā).pdf

1、斜紋夜蛾Spodoptera litura(Fabric ius)屬鱗翅目(Lepidopetra)夜蛾科(Notcudiea)，具有食性雜、繁殖力強、暴發(fā)快等特點，是一種危害極大的農業(yè)害蟲。長期以來，斜紋夜蛾依賴于化學防治，抗藥性問題十分突出，研究探索斜紋夜蛾微生物防治的新技術是一項緊迫的任務。昆蟲病原真菌在害蟲生物防治中已被廣泛研究和應用，但針對斜紋夜蛾的研究報道還十分有限。本研究以斜紋夜蛾為靶標害蟲，篩選了對斜紋夜蛾二齡幼蟲高毒力

2、的菌株，優(yōu)化了基于當選菌株孢子油劑的制劑配方，評價了當選菌株孢子油劑與低劑量抑太保對斜紋夜蛾的協(xié)同作用效果，并進行了斜紋夜蛾的田間藥效試驗。主要內容和結果分述如下：
　　 對斜紋夜蛾高毒力的球孢白僵菌株篩選比較測定了不同地理和寄主來源的12株球孢白僵菌Beauveria bassiana對斜紋夜蛾二齡幼蟲的毒力。用含0.02％吐溫80的無菌水將各菌株孢子粉配制成1×108個孢子/mL的高濃度懸液作為處理，以0.02％吐溫80作為

3、對照，每處理三次重復，自動噴塔噴霧接種到斜紋夜蛾二齡幼蟲上，孢子沉降量為2500(2132-2807)個孢子/mm2，因菌株而異。幼蟲接種后在在25℃和12L:12D條件下用甘蘭葉片飼養(yǎng)，連續(xù)7天逐日定時觀察記錄死亡率，病死蟲尸保濕培養(yǎng)。各接菌處理在第7天的累計校正死亡率為33.9‰82.4％，不同菌株之間差異顯著(P<0.01)，但同一菌株的各重復之間無顯著差異（P>0.05）。其中，誘發(fā)幼蟲死亡率最低的菌株為Bb2336和Bb453

4、5，分別為33.9％(+1.1％)和33.9％(+5.9％)，而毒力最高的Bb2860菌株誘發(fā)幼蟲死亡率高達82.4％(+6．O％)。此外，生測中的大多數(shù)蟲尸在保濕培養(yǎng)的1～3天內都能長出菌絲，并在體表產(chǎn)生分生孢子。
　　 球孢白僵菌孢子制劑和貯存技術的改進將球孢白僵菌Bb2860菌株的高純度孢子粉分別貯存于4℃和25℃下，孢子油劑貯存于25℃下。每月定期檢測孢子粉活孢率、耐熱能力和耐紫外輻射能力，油劑則只檢測孢子活孢率，持續(xù)貯

5、存檢測18個月。結果表明，孢子粉貯存期間的活孢率在不同溫度處理及不同貯存期之間差異極顯著。在25℃下貯存的孢子粉與油劑的活孢率也差異顯著。在第12個月時，貯存于4℃下的孢子活孢率為85％，貯存于25℃的孢子粉活孢率幾乎降為0，而此時油劑中活孢率仍維持在66％。同時，25℃下貯存的孢子粉耐熱能力和耐UV-B紫外輻射能力均比4℃貯存的孢子粉下降更快。兩因素方差分析表明，孢子粉耐熱能力和耐輻射能力在4"C和25℃之間以及不同貯存期之間均差異極

6、顯著。油劑的粘度會隨穩(wěn)定劑濃度的升高而增加，同時使得油劑中孢子沉降速度減緩。在10％穩(wěn)定劑濃度下，加入8％的乳化劑，可以使油劑稀釋液穩(wěn)定達到1.2x107個孢子/mL的田間適噴濃度。
　　 球孢白僵菌孢子油劑與低劑量抑太保對斜紋夜蛾的互作效果測定以球孢白僵菌Bb2860的不同孢子制劑對斜紋夜蛾二齡幼蟲進行生物測定，各制劑的噴菌處理均包括低、中、高(106、107、108個孢子/mL)三個濃度。生測1為未劑型化孢子粉的吐溫80水懸

7、液；生測2為不含穩(wěn)定劑的孢子油劑；生測3為含有穩(wěn)定劑的孢子油劑；生測4為抑太保對照生測，包括常規(guī)推薦用量(700 mL5％乳油/公頃，稀釋1000倍噴霧)及常規(guī)推薦用量的1/5和1/10三個劑量；生測5為油劑與低劑量抑太保的協(xié)同生測試驗（即油劑3與抑太保1/10的推薦用量混用）。對生測結果按時間．劑量，死亡率模型進行模擬分析，結果表明，不同制劑處理的幼蟲致死率差異極顯著(F4,2s=17.1，P<0.01)，同一制劑的不同劑量間也差異極

8、顯著(F2,2s=115.6，P<0.01)。根據(jù)相同孢子劑量處理的死亡率高低，生測2優(yōu)于生測1，而生測3則優(yōu)于生測2。油劑與低劑量的抑太保協(xié)同作用時，殺蟲速度和死亡率均顯著提高。
　　 球孢白僵菌孢子懸乳劑與低劑量抑太保混用對花菜地斜紋夜蛾的田間防效基于以上室內試驗結果，分別于2009年9月和2010年9月在安徽馬鞍山選取一塊花椰菜地進行獨立的田間藥效試驗，考察純菌劑（孢子油縣劑）、純藥劑（抑太保）及菌藥混用各處理對斜紋夜蛾的

9、田間防效。試驗共包括5個處理，即純菌劑(I)、抑太保常規(guī)用量的1/10處理(Ⅱ)、抑太保常規(guī)用量處理(Ⅲ)、菌藥混用處理(Ⅳ=Ⅰ+Ⅱ)及清水對照(V)。菌劑處理的實際用菌量按1.5 L孢子油劑/公頃，即相當于每公頃1.5～1.8xl013個孢子的用菌量，處理Ⅱ和Ⅲ中的抑太保實際用量分別為75 mL乳油/公頃和750mL乳油/公頃．除對照外各處理的孢子油懸劑在施用前先加入8％乳化劑(AEO-3)，混合均勻，然后用清水稀釋500倍。采用背負

10、式手動噴霧器在0.2-0.4 mPa的工作壓力下噴霧。每處理4個小區(qū)（重復），每小區(qū)面積為15㎡，隨機區(qū)組排列。2009年的田間試驗在初次施藥后，分別于第3、6、9天檢查蟲口情況。2010年的田間試驗在初次噴藥后，分別于第3和第5天檢查蟲口，并于第5天第二次施藥。第二次施藥7天后檢查蟲口并進行第3次施藥，7天后再次檢查蟲口。
　　 在2009年的田間試驗中，施藥3天后抑太保常規(guī)用量處理對斜紋夜蛾的防效最好，相對防效達96.7％(

11、+2.7％)；菌藥混用和純菌劑的相對防效分別為95.2％(+4.6％)和91.6(+2.5％)，而低劑量抑太保的相對防效僅為52.4％(+9.0％)。藥后9天，各處理的蟲口均有所反彈，菌藥混用和常規(guī)用量抑太保處理的相對防效分別為91.1％(±2.O％)和89.7％(+3.8％)，純菌劑處理的防效降為77.6(±6.1％)，而低劑量抑太保的防效僅為49．O％(+10.5％)。兩因素隨機區(qū)組方差分析表明，相對防效在不同處理間差異極顯著(F3

12、,45=162.6，P

13、0.01)和抽樣日（用藥次數(shù)）之間(F4,57=1047.8，P　　 綜合以上結果，本研究的成果和創(chuàng)新點在于：一是利用本實驗室現(xiàn)有生測體系成功篩選到一株對斜紋夜蛾高毒力的球孢白僵菌菌株Bb2860，能夠直接侵染誘發(fā)較高的幼蟲死亡率。二是揭示了該菌株孢子油劑與低劑量抑太?；煊脤π奔y夜蛾二齡幼蟲的協(xié)同效應，并在次基礎上進行了田間試驗，證明純菌劑