金烏賊繁殖、發(fā)育及熒光標(biāo)志技術(shù)的研究.pdf

1、本文以金烏賊為研究對(duì)象,采用實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)、組織學(xué)和生理學(xué)手段,研究了金烏賊親體培育及人控環(huán)境下的繁殖行為:性腺發(fā)育和卵子發(fā)生的組織學(xué);幼體金烏賊的生長發(fā)育及消化酶活性的變化;視覺發(fā)育;環(huán)境條件的變化對(duì)幼體金烏賊攝食行為的影響以及利用熒光染色劑(ALC)標(biāo)志金烏賊內(nèi)殼的放流標(biāo)志技術(shù)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.以采自日照嵐山頭金烏賊為研究對(duì)象,觀察了養(yǎng)殖池內(nèi)金烏賊親體的交配和產(chǎn)卵行為,比較了不同產(chǎn)卵基附卵效果的差異,分析了金烏賊胴

2、長、體重與懷卵量之間的關(guān)系,確定了金烏賊親體的產(chǎn)卵節(jié)律。結(jié)果顯示:親體金烏賊求偶、追偶、交配、產(chǎn)卵、扎卵等行為明顯;不同產(chǎn)卵基附卵效果差異顯著,網(wǎng)繩產(chǎn)卵基和檉柳產(chǎn)卵基附卵效果較好,地膚草較差;金烏賊懷卵量與胴長和體重之間相關(guān)關(guān)系不顯著,懷卵量浮動(dòng)于500～1.500粒之間,平均懷卵量為1114粒;產(chǎn)卵時(shí)間較有規(guī)律,主要集中于21時(shí)至次日凌晨3時(shí)。
　　 2.以采自日照嵐山頭金烏賊親體5尾(3雌,2雄)和金烏賊幼體39尾為研究對(duì)象

3、,研究了親體金烏賊生殖系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)特性以及金烏賊幼體發(fā)生性腺分化的時(shí)間。結(jié)果表明,金烏賊屬雌雄異體。雄性生殖系統(tǒng)包括精巢、輸精管、精囊、副性腺和精莢囊。精莢囊中充滿了排列緊密的成熟精莢。精莢為棒球棒狀,由體腔中的精子、接合體、螺旋發(fā)射器和帽子組成。精莢縱切面顯示精子以“V”字型儲(chǔ)藏于精莢體腔內(nèi),橫切面顯示精子呈螺旋狀儲(chǔ)藏于精莢體腔內(nèi),且在接近體腔中心位置螺旋狀尤為明顯。雌性生殖系統(tǒng)包括卵巢、輸卵管、輸卵管腺以及附屬腺。幼體形成卵巢的時(shí)間約

4、為孵化后7d,此時(shí)顯微鏡下可觀察到卵巢中包含一些著色較淺的卵母細(xì)胞。根據(jù)卵母細(xì)胞的大小、卵母細(xì)胞核的形態(tài)及卵母細(xì)胞與濾泡細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化,將金烏賊卵子發(fā)生劃分為8個(gè)時(shí)期。
　　 3.對(duì)自然海區(qū)及養(yǎng)殖池內(nèi)采集的金烏賊受精卵進(jìn)行了人工孵化,對(duì)孵化后金烏賊幼體生長發(fā)育的生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)量,同時(shí)分析了酸性蛋白酶、脂肪酶等消化酶隨日齡的活性變化。結(jié)果顯示:受精卵孵化率受水溫影響差異不顯著,但受鹽度影響差異顯著;小水體條件下金烏賊幼體的存活

5、率偏低為81.4％,大水體條件下,存活率較高為100％;如初期餌料充足,幼體烏賊規(guī)格整齊,放養(yǎng)密度較低時(shí)不會(huì)出現(xiàn)自殘現(xiàn)象;金烏賊幼體生長迅速,屬異速生長型;胴寬/胴長、殼寬/殼長的比值隨生長呈下降趨勢(shì);此外,金烏賊幼體的酸性蛋白酶和脂肪酶活性均隨日齡的增加而升高,至孵化后210d,分別達(dá)158.3 U/mL和183.2 U/mL。
　　 4.運(yùn)用顯微和超顯微方法對(duì)金烏賊的視覺發(fā)育進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:金烏賊視網(wǎng)膜內(nèi)四層結(jié)構(gòu)清晰可

6、見,由外向內(nèi)依次為感桿層、次級(jí)感桿層、內(nèi)界層、神經(jīng)纖維層。1)感桿層,感桿層由許多排列規(guī)則、緊密的頂端突起組成,頂端突起外附有微絨毛。縱切面觀察發(fā)現(xiàn),微絨毛呈一定角度排列于每一個(gè)頂端突起周圍,但頂端卻未見微絨毛;橫切面觀察發(fā)現(xiàn),頂端突起形狀多樣,呈圓形、紡錘形、三角形等不同形態(tài)。微絨毛呈放射狀排列在頂端突起周圍,但有些部位缺少微絨毛。視網(wǎng)膜發(fā)育早期階段,微絨毛較短,且排列規(guī)律性欠佳,隨生長發(fā)育,微絨毛逐漸變長,排列較有規(guī)律。此外,頂端突

7、起中含有色素顆粒和小泡,小泡源于微絨毛,微絨毛失去小泡時(shí)便會(huì)萎縮。小泡內(nèi)含有色素顆粒,當(dāng)?shù)竭_(dá)頂端突起時(shí)便會(huì)破裂并將色素顆粒釋放出來。隨著色素顆粒的增多,色素顆粒常會(huì)在頂端突起底部聚集,形成集合體。2)次級(jí)感桿層,次級(jí)感桿層中細(xì)胞質(zhì)含有色素顆粒、小泡、線粒體、高爾基復(fù)合體和髓樣體。線粒體和高爾基復(fù)合體數(shù)量隨生長發(fā)育逐漸增多,髓樣體規(guī)格和數(shù)量也隨生長不斷增加。隨生長發(fā)育次級(jí)感桿層中細(xì)胞核不斷穿越極板進(jìn)入內(nèi)界層,進(jìn)入內(nèi)界層的細(xì)胞核含有較多異染

8、色質(zhì),形狀變得細(xì)長且電子亮度加深。支持細(xì)胞數(shù)量隨生長發(fā)育逐漸增多,其微絨毛嵌入感桿層。3)內(nèi)界層,內(nèi)界層中富含線粒體、核糖體、高爾基復(fù)合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和髓樣體,且數(shù)量隨生長發(fā)育明顯增多。4)神經(jīng)纖維層,神經(jīng)纖維層內(nèi)含有感受細(xì)胞軸突、神經(jīng)纖維、線粒體、高爾基復(fù)合體和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)纖維層的機(jī)能隨生長逐漸趨于完善。另外,測(cè)量計(jì)算得知,感桿層厚度及單位面積微絨毛表面積的總量隨生長與日齡呈冪函數(shù)關(guān)系,晶狀體直徑隨生長與日齡呈線性關(guān)系?？偨Y(jié)發(fā)現(xiàn),金

9、烏賊的視敏度隨生長發(fā)育不斷增加。
　　 5.研究了不同底質(zhì)(玻璃底、沙底),光照度(2501x、0.11x),視角(視野前方、上方、下方)對(duì)金烏賊攝食行為的影響。結(jié)果表明:不同底質(zhì)條件下,金烏賊的攝食行為表現(xiàn)出顯著差異,沙底條件下,金烏賊表現(xiàn)出明顯的隱蔽行為;金烏賊具有較高的視敏度,在光照強(qiáng)度2501x與0.11x條件下攝食行為差異不顯著;金烏賊攝食視野上方食餌的成功率較攝食視野下方或前方時(shí)低約20％;在光照度2501x條件下,

10、胴背長43mm、48mm、56mm的金烏賊對(duì)食餌反應(yīng)距離分別為:130.0cm、135.5cm、143.1cm,光照度降至0.11x時(shí),分別為:115.0 cm、120.6 cm、126.3 cm.。
　　 6.以金烏賊為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,利用熒光物質(zhì)-茜素絡(luò)合指示劑(Alizarin Complexone ALC)浸泡金烏賊幼體,對(duì)其內(nèi)殼進(jìn)行標(biāo)志,所用熒光染色劑濃度為6.0～8.0×10-3％,浸泡染色時(shí)間24h。將標(biāo)志組和對(duì)照組的金

11、烏賊幼體分別暫養(yǎng)于1.5m×1.5m×1.5m水泥池30d,后將暫養(yǎng)的幼體放養(yǎng)于面積為2667m2的室外土池,并在60d后,將平均胴背長達(dá)91.4mm(對(duì)照組)、87.6mm(標(biāo)志組)金烏賊幼體移入室內(nèi)水泥池越冬,整個(gè)實(shí)驗(yàn)歷時(shí)210d。實(shí)驗(yàn)期間,分別在標(biāo)志后15、30、45、60、90、210d對(duì)金烏賊進(jìn)行隨機(jī)取樣,解剖出內(nèi)殼觀察標(biāo)志色保留狀況并對(duì)金烏賊生長發(fā)育及存活率進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果顯示,標(biāo)志金烏賊的成活率為100％;方差分析顯示,標(biāo)志