碭山梨炭疽病菌鑒定及有效藥劑篩選.pdf

1、近年來(lái)，在黃河故道地區(qū)“碭山酥梨”、“黃冠梨”、“馬蹄黃”等品種上，發(fā)生了一種嚴(yán)重的病害，具體表現(xiàn)在梨成熟前先是果實(shí)、葉片表面出現(xiàn)一至多個(gè)黑點(diǎn)，3～5d后病果出現(xiàn)圓形或不規(guī)則形的輪紋狀或凹陷狀病斑，蔓延很快，難以控制，當(dāng)?shù)厮追Q(chēng)“黑點(diǎn)病”。這種病害不僅造成采前果實(shí)腐爛，還引起樹(shù)體大量落葉。2008年，安徽省碭山縣梨園炭疽病暴發(fā)，部分發(fā)病嚴(yán)重的梨園，采前病果率為100％，爛果率高達(dá)70％以上，當(dāng)?shù)乩娼?jīng)濟(jì)損失慘重。
　　 為了明確近年

2、來(lái)嚴(yán)重為害碭山梨的致病病原菌種類(lèi)，研究常用殺菌劑對(duì)致病菌菌絲生長(zhǎng)、分生孢子萌發(fā)的抑制作用，作者對(duì)碭山地區(qū)不同梨園病害發(fā)生情況進(jìn)行實(shí)地調(diào)查，統(tǒng)計(jì)不同樹(shù)齡、不同種植密度梨園病害的發(fā)生情況，并采集了6組標(biāo)樣；對(duì)這6種不同病斑癥狀類(lèi)型的果實(shí)、葉片樣本分別進(jìn)行發(fā)病組織培養(yǎng)、單孢分離純化，根據(jù)病原菌的形態(tài)特征和致病性，進(jìn)行初步鑒定；采用CTAB法提取病原菌基因組DNA，以之為模板，利用真菌rDNA-ITS克隆通用引物ITS1和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增

3、，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠回收試劑盒回收、測(cè)序，利用NCBI在線Blast工具進(jìn)行致病菌rDNA-ITS同源性比較，應(yīng)用BioEdit程序進(jìn)行序列分析，并用MEGA3.1軟件按照UPGMA法構(gòu)建系統(tǒng)聚類(lèi)樹(shù)。選用24種常用殺菌劑分別對(duì)病原菌菌絲和分生孢子進(jìn)行處理，觀測(cè)其化學(xué)抑制效果。
　　 試驗(yàn)主要研究結(jié)果如下：
　　 1、田間調(diào)查結(jié)果顯示，不同種植密度的梨樹(shù)發(fā)病情況不一，栽培密度為2m×4 m梨樹(shù)發(fā)病最重，病果率達(dá)到40.42％;

4、5 m×6 m發(fā)病較重，病果率為31.24％;8 m×8 m發(fā)病較輕，病果率為11.07％。
　　 2、病原形態(tài)與致病性研究：本試驗(yàn)從不同癥狀類(lèi)型病斑上分離出了6個(gè)純化菌株，通過(guò)病原菌形態(tài)學(xué)鑒定，這6個(gè)病原菌菌株形態(tài)特征相同，且與已報(bào)道的炭疽病菌（Colletotrichum spp.）形態(tài)特征相似；用上述純培養(yǎng)菌株接種于健康果實(shí)和葉片上，又引起與田間原標(biāo)本相同的病害癥狀。
　　 3、病原分子鑒定：通過(guò)病原菌rDNA-I

5、TS克隆測(cè)序、BLASTn比對(duì)分析，6個(gè)菌株為同一致病菌，且該致病菌與臺(tái)灣棗（Taiwan jujube）炭疽菌株（Colletotrichum sp. EXMQ-1：登錄號(hào)FJ233185）、日本超市水果(Japanese fruit)炭疽菌株（Glomerella cingulata;登錄號(hào)AB219012）和鳳梨草莓（Fragaria ananassa）炭疽菌株（C gloeosporioides；登錄號(hào)EU200455）的rDN

6、A-ITS序列一致。
　　 4、抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示，戊唑醇430 g/L懸浮劑等8種殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)100％;70％代森錳鋅可濕性粉劑等8種藥劑處理，病原菌分生孢子萌發(fā)率為0。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明危害碭山梨的炭疽病病原菌為半知菌亞門(mén)刺盤(pán)孢屬的膠胞炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides），其有性階段為圍小叢殼（Glomerella cingulata）。不同的化學(xué)藥劑處理，對(duì)梨炭疽