棉鈴蟲甾醇載體蛋白-2(HaSCP-2)在幼蟲不同組織中的表達及其抑制劑生物活性測定.pdf

1、膽固醇是昆蟲細(xì)胞細(xì)胞膜的重要組成成分(占細(xì)胞膜組成的14％)，也是合成蛻皮激素等某些激素的前體，對昆蟲生理及其代謝過程具有重要作用。但是，由于昆蟲體內(nèi)缺少膽固醇合成途徑中所必須的關(guān)鍵性的酶，因此不能從頭合成，必需從食物中獲得，這種生理限制顯示膽固醇的吸收／轉(zhuǎn)運對昆蟲來說尤為重要。因此參與膽甾醇吸收／轉(zhuǎn)運的固醇載體蛋白（sterol carrier protein-2，SCP-2）被認(rèn)為是研制新型生物殺蟲劑的有效靶標(biāo)，已有研究顯示蚊子SC

2、P-2是研制新型殺蚊劑的一個有效靶標(biāo)，并篩選出一些伊蚊SCP-2抑制劑(sterol carrier protein-2 inhibitors，SCPIs)，對伊蚊有相當(dāng)好的致死作用。此外，SCPIs也可以阻斷煙草天蛾幼蟲(Manduca sexta)（鱗翅目）對膽固醇的吸收，致其死亡。本實驗就是以鱗翅目最重要的害蟲棉鈴蟲（Helicoverpa armigera）為研究對象，對棉鈴蟲固醇載體蛋白（HaSCP-2）在不同組織不同齡期的差

3、異表達及其抑制劑生物活性進行研究。
　　 首先我們采用RT-PCR技術(shù)，檢測了HaSCP-2基因棉鈴蟲幼蟲在不同組織中的轉(zhuǎn)錄，HaSCP-2 mRNA在被測試的所有組織中都能檢測到，這表明HaSCP-2的表達在進食期沒有組織特異性。為了檢測HaSCP-2在不同組織中表達量的差別，本研究用實時熒光定量PCR技術(shù)對進食期的四齡（第一天和第二天）、五齡（第一天、第二天、第三天）棉鈴蟲幼蟲的不同組織(脂肪體(fat body,FB);馬

4、氏管(Malpighian tube，Mt);后腸(hindgut，Hdg);中腸(midgut,Mdg;背部表皮(epidermis，Ep)和頭部(Head)進行定量檢測。結(jié)果表明在中腸樣品中的HaSCP-2mRNA水平最高，雖然其它組織中都可以檢測到，但轉(zhuǎn)錄水平較低，證明鱗翅目幼蟲中腸是吸收甾醇的主要部位。因此，HaSCP.2基因的空間轉(zhuǎn)錄譜與其在中腸中協(xié)助膽固醇的吸收的作用是一致的。
　　 為了研究SCPIs對HaSCP-

5、2是否也有抑制作用，本實驗從棉鈴蟲一齡第一天開始，用系列濃度梯度(0.1mM、1mM、10mM、25mM)的抑制劑(AeSCPI-2和SCPI-7)對其進行生物測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SCPI-2使棉鈴蟲體重減輕，幼蟲初期減輕比后期明顯；極少量的發(fā)育進程很緩慢；有些在化蛹前變黑，不能化蛹；少量的不能羽化蛾或羽化受阻，蛹?xì)ね瞬煌耆?。這些結(jié)果顯示抑制劑對棉鈴蟲的生長發(fā)育具有一定的影響。
　　 本實驗為進一步弄清楚棉鈴蟲SCP-2基因分子結(jié)構(gòu)奠