兩種棉鈴蟲組織蛋白酶B抑制因子的純化及性質(zhì)研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文兩種棉鈴蟲組織蛋白酶B抑制因子的純化及性質(zhì)研究姓名：張新昌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙小凡20050510山東大學(xué)碩士學(xué)位論文兩種棉鈴蟲組織蛋白酶B抑制因子的純化及性質(zhì)研究摘要在動(dòng)植物組織中，廣泛存在著抑制蛋白酶分解活性的物質(zhì)，這種物質(zhì)被稱為蛋白酶抑制因子(proteinaseinhibitor，PI)，棉鈴蟲組織蛋白酶B(HelicoverpaarmigeracathepsinB，HCB

2、)抑制因子是其中重要的一種。許多研究表明，從植物中提取到的組織蛋白酶B抑制因子，可以明顯抑制組織蛋白酶B的活性，從而阻滯昆蟲的生長(zhǎng)和發(fā)育，最終達(dá)到殺蟲的效果。因此，HCB抑制因子的研究一一一一具有良好的應(yīng)用前景。棉鈴蟲(Helicoverpaarmigera)是一種重要的農(nóng)業(yè)害蟲，嚴(yán)重危害著棉花的生產(chǎn)。HCB在棉鈴蟲成蟲期表達(dá)，參與成蟲脂肪體的解體，為卵母細(xì)胞發(fā)育提供養(yǎng)料，在胚胎發(fā)育中水解卵黃蛋白，供給胚胎發(fā)育必需的氨基酸，因此，HCB

3、可以成為害蟲控制的新靶標(biāo)。目前，國(guó)內(nèi)外報(bào)道的研究主要是針對(duì)昆蟲絲氨酸類蛋白酶的各種抑制因子，尚未見將胚胎發(fā)育中的半胱氨酸類蛋白酶抑制因子應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因抗蟲作物研究的報(bào)道，HCBSunI和HCB—SoyI的發(fā)現(xiàn)可以為轉(zhuǎn)基因抗蟲植物的研究提供新的思路。本實(shí)驗(yàn)室前期研究工作表明，許多植物的果實(shí)，如向日葵種子、大豆、棉籽和大米，蛋白粗提液中都含有HCB抑制因子，并且具有極強(qiáng)的抑制活性。本論文在此基礎(chǔ)上，選擇抑制因子含量較多的向日葵種子(Sunfl

4、owerseed)和大豆(Soybean)作為材料，應(yīng)用常規(guī)柱層析法，從中純化得到了兩種HCB抑制因子，分別命名為HCB—SunI和HCB—SoyI。首先，通過50％(NH4)2S04沉淀植物蛋白勻漿液，然后過Sephadex(375分子篩層析柱，收集其中有活性的部分，透析后過DEAEToyopearl陰離子交換柱，得到了抑制因子的純化產(chǎn)物。接著，對(duì)它們的一些生化性質(zhì)進(jìn)行了研究。SDSPAGE顯示，HCBSunI和HCB—SoyI都屬于