四川省雅江縣松茸生長(zhǎng)地土壤微生物多樣性研究.pdf

1、從四川省雅江縣4個(gè)不同海拔松茸生長(zhǎng)地采集A、B層土壤8份，測(cè)定了土壤微生物量碳氮，酸性磷酸酶、脲酶、過(guò)氧化氫酶活性，可培養(yǎng)微生物數(shù)量；對(duì)分離獲得的40株純培養(yǎng)細(xì)菌，采用BOXAIR-PCR、16S rDNA PCR-RFLP、16S rRNA基因全序列分析，研究了其遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育及分類地位；進(jìn)而采用PCR-DGGE方法研究了供試土樣中細(xì)菌、真菌的多樣性。其結(jié)果如下：
　　 1.供試土樣微生物量碳在132.07mg/kg～3

2、71.95mg/kg之間，微生物量氮含量在14.15～53.88mg/kg之間。
　　 2.供試土樣酸性磷酸酶含量在0.0938～0.3052mg·g-1·h-1之間，脲酶含量在0.0586～0.2252mg·g-1·h-1之間，過(guò)氧化氫酶含量為0.0229～0.0355mg·g-1·h-1。三種酶在土壤剖面中垂直分布有明顯的層次性，多隨土層加深而遞減。
　　 3.供試土樣中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量：細(xì)菌為3.13×105cf

3、u·g-1～3.76×107cfu·g-1，放線菌為0～3.00×106cfu·g-1,真菌數(shù)量為4.6×104cfu·g-1～1.40×106cfu·g-1。分離純化得到40株純培養(yǎng)細(xì)菌菌株，19株為G+，21株為G-菌株。
　　 4.對(duì)40株細(xì)菌的BOXAIR-PCR指紋圖譜進(jìn)行了聚類分析結(jié)果顯示，在65％的相似水平上所有菌株聚在一起，在74％的相似水平上分為6個(gè)遺傳群；16S rDNAPCR-RFLP聚類分析顯示供試菌株在

4、65％相似水平處，被分為G+和G-兩大類，在74％的相似水平上被劃分為7個(gè)群。
　　 5.選取了11個(gè)純培養(yǎng)細(xì)菌測(cè)序，初步明確了其系統(tǒng)發(fā)育地位。11個(gè)代表菌株分別位于11個(gè)系統(tǒng)發(fā)育分支上，分屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)，Lysinibacillus屬，類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)，兩面神菌屬(Janibacter)，枝動(dòng)菌屬(Mycoplana)，Collimonas屬，貪噬菌屬(Var iovorax)，寡

5、養(yǎng)單胞菌屬(Stenotrophomonas)，假單胞菌屬(Pseudomonas)，噬冷桿菌屬(Psychrobacter)，土地桿菌屬(Pedobacter)。
　　 6.對(duì)供試土樣的細(xì)菌總DNA分析得到了清晰的DGGE圖譜，多樣性豐富。選取10根DGGE條帶克隆測(cè)序后顯示：代表優(yōu)勢(shì)菌群中有1個(gè)屬于放線菌門、2個(gè)屬于酸桿菌門、2個(gè)屬于變形菌門，其余5個(gè)屬于未分類細(xì)菌。
　　 7.真菌DGGE圖譜條帶數(shù)目多且亮度很高，