11株P(guān)RRSV基因序列分析、RT-LAMP檢測方法的建立及豬感染高致病PPRSV的病理學(xué)觀察.pdf

1、1、PRRSV RT-LAMP快速檢測方法的建立
　　 針對PRRSV感染情況，為適合基層和現(xiàn)場檢測建立了快速檢測PRRSV的RT-LAMP方法，就新的檢測方法進行了特異性、靈敏性和臨床試驗確定。特異性試驗結(jié)果表明本研究所建立的RT-LAMP檢測方法只針對PRRSV;靈敏度試驗結(jié)果顯示RT-LAMP是RT-PCR方法的100倍;臨床試驗中RT-LAMP方法的檢出率與RT-PCR檢測方法的符合率為90.9％;差異為4.8％。

2、>　　 2、PRRSV分離、鑒定
　　 利用MARC-145細(xì)胞和PAM細(xì)胞，從遼寧、河北、山東、浙江、河南等地發(fā)病豬的肺臟、脾臟以及淋巴結(jié)中分離到疑似PRRSV11株。經(jīng)PCR試劑盒鑒定，本次試驗共分離到11株P(guān)RRSV。
　　 3、PRRSV NSP2、ORF5和ORF7基因的克隆及序列分析
　　 應(yīng)用RT-PCR的方法對11株病毒的NSP2基因、ORF5基因、ORF7基因進行了全基因序列擴增、克隆測序，并

3、利用分子生物學(xué)軟件對測序結(jié)果進行了序列比對。通過對序列的同源性及遺傳發(fā)育進化分析，我們發(fā)現(xiàn):本次試驗分離到的11株病毒同屬于美洲株，并且與國內(nèi)高致病性JXA1株高度同源。這些毒株均在NSP2基因相同位置處缺失了90個堿基，表明2008年的PRRSV流行株仍然以基因缺失株為主;我們發(fā)現(xiàn)這11株病毒在E蛋白的信號肽區(qū)以及跨膜區(qū)有著較為一致的突變;分離株N蛋白Pat7基序的突變是一致的，這是否會影響到PRRSV的核定位，還需要進一步的研究去驗

4、證。
　　 4、分離株致病力的研究
　　 根據(jù)分離株的遺傳發(fā)育進化樹，挑選P-JH-080303株、P-NB-081011株、P-HD-081019株進行動物攻毒試驗，以JXA1株為陽性對照組。通過觀察和記錄動物攻毒以后的表現(xiàn)，進行分離株毒力強弱的鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn):P-JH-080303株雖能引起動物發(fā)病，但最終并不能致使動物死亡;而另外兩株（P-NB-081011株和P-HD-081019株）和JXA1株一樣，能導(dǎo)致動物

5、的死亡。我們得出結(jié)論:以NSP2基因缺失為特征的流行毒株，并非都是高致病性毒株，PRRSV毒株的致病力與NSP2基因的缺失并無直接聯(lián)系。
　　 5、自然發(fā)病組與人工感染發(fā)病組的病理組織學(xué)對比觀察
　　 通過對來自臨床的PRRSV發(fā)病動物和人工感染PRRSV試驗動物的病理組織學(xué)觀察，我們發(fā)現(xiàn):來自臨床的自然發(fā)病組無論在剖檢癥狀還是組織病理學(xué)變化方面，都表現(xiàn)為多種疾病的混合感染;通過與臨床發(fā)病組的對照，PRRSV在呼吸系統(tǒng)和