高致病性藍(lán)耳病病原的分離鑒定和RT-PCR診斷方法的建立.pdf

1、2006年夏秋季節(jié)，我國南方部分地區(qū)豬群出現(xiàn)了以高熱、厭食或不食、眼結(jié)膜炎、咳嗽、喘等呼吸道癥狀、后軀無力不能站立或搖擺等神經(jīng)癥狀以及高死亡率為主要臨床特征的一種新的傳染病，當(dāng)時(shí)由于具體病因不明，所以被稱為豬的“高熱病”。鑒于其對我國經(jīng)濟(jì)和國民生活產(chǎn)生的巨大影響，診斷、分離和鑒定該病原以發(fā)現(xiàn)更為有效的監(jiān)測方法和控制策略是非常必要的。 本研究用在湖北地區(qū)采集的組織病料在仔豬體上進(jìn)行病例復(fù)制，采集產(chǎn)生典型病變豬的組織毒分別用各種原代

2、細(xì)胞和傳代細(xì)胞系進(jìn)行分離、鑒定，測定TCID50，RT-PCR擴(kuò)增其高變區(qū)和全部蛋白編碼區(qū)，電鏡觀察各組織器官病變情況。 1、將肺部病料處理后分別用豬肺泡巨噬細(xì)胞、豬原代腎細(xì)胞、Marc-145、PK-15、BHK-21等原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞系進(jìn)行病毒的分離與鑒定，結(jié)果只在Marc-145細(xì)胞上有典型病變，連續(xù)傳代3次后病變穩(wěn)定，接毒48h～72h后病變可達(dá)70％左右，傳至第7代時(shí)TCID50可達(dá)10-5.51/ml。由此證實(shí)本研

3、究成功地分離到一株高致病性藍(lán)耳病病毒(將其命名為HBGS)。所分離到的毒株致病力強(qiáng)，目前已傳至第14代，可通過進(jìn)一步有限傳代為疫苗研制提供一個(gè)良好的候選毒株。 2、對病毒高變區(qū)和全部的蛋白編碼區(qū)的核酸序列比對發(fā)現(xiàn)，HBGS分離株與歐洲型標(biāo)準(zhǔn)株LV株只有66.2％的序列一致性，與美洲型標(biāo)準(zhǔn)株ATCCVR-2332株的核苷酸一致性可達(dá)91.8％，和先前的CH1a、HB-1、BJ-4等中國分離株的核苷酸的一致性分別為96.2％、97.