高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒致弱效果的免疫病理學(xué)和分子病理學(xué)評價.pdf

1、2006年，在我國爆發(fā)了高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（High pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HPPRRS）。南方的很多地區(qū)從規(guī)模化大豬場到農(nóng)村的散養(yǎng)戶都遭到了不同程度影響。表現(xiàn)為不同年齡和體重的豬都能感染，感染豬群表現(xiàn)為高熱（41-42℃），昏睡，呼吸困難。在仔豬發(fā)病率達100％，死亡率可達50％以上，母豬流產(chǎn)率可達30％以上，育肥豬也可發(fā)病死亡。病原主

2、要為美洲型經(jīng)典毒株P(guān)RRSV在ORF1a處的部分Nsp2基因缺失所產(chǎn)生的變異株。HPPRRSV潛伏期2-7天，主要表現(xiàn)高熱，懷孕各階段的母豬流產(chǎn)、死胎，及后備豬發(fā)病后死亡，且哺乳仔豬及生長育肥豬也有較高的死亡率。
　　 為評價HPPRRS病毒（HPPRRS virus，HPPRRSV）的致弱效果，篩選弱毒疫苗株，將HPPRRSVHUN4株（以下略為強毒株）和其致弱株HUN4一Fxx（以下略為弱毒株）分別接種54頭40-42天的仔

3、豬。接種后，分別于1、3、5、7、10、14、21、28天剖殺，其間觀察臨床癥狀及病理剖檢變化，取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、淋巴結(jié)、大腦、小腸、胃、扁桃體等器官用4％多聚甲醛固定后，HE染色，進行組織病理學(xué)觀察。結(jié)果表明在接種強毒株后的5-21天可出現(xiàn)一些仔豬死亡，剖檢表現(xiàn)為全身淋巴結(jié)出血，脾臟邊緣有梗死灶，肝臟出現(xiàn)灰白色結(jié)節(jié)，肺臟出現(xiàn)肉樣變及間隔增寬，腦有輕度水腫等病變。病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)大部分接種強毒的豬肺臟出現(xiàn)明顯的間質(zhì)性肺炎

4、變化；淋巴結(jié)中淋巴細胞明顯缺失，伴有不同程度的嗜酸性粒細胞浸潤：脾臟白髓淋巴細胞明顯壞死減少；扁桃體淋巴小結(jié)內(nèi)淋巴細胞有顯著減少，伴有少量嗜酸性粒細胞浸潤；大腦分子層有血管套形成。而接種弱毒株的仔豬未見明顯的臨床和病理剖檢變化，病理組織學(xué)觀察則僅見淋巴器官內(nèi)淋巴細胞減少。
　　 應(yīng)用間接免疫熒光（indirect immunofluorcsccncc assay，IFA）、免疫組織化學(xué)（immunohistochemical p

5、roccdrues，IHC）和原位雜交（in situ hybrisization，ISH）方法檢測了強弱毒株病毒抗原和病毒核酸在接種豬體內(nèi)的分布，三種方法在強、弱毒株接種豬的檢出率分別為肺臟33.33％，0％；75％，37.5％；95.8％，62.5％。扁桃體87.5％，62.5％；91.7％，87.5％；95.8％，87.5％。脾臟45.8％，37.5％；83.33％，50％；66.7％，56.25％。頜下淋巴結(jié)91.6％，75％；

6、100％，100％；100％，87.5％。腸系膜淋巴結(jié)87.5％，68.75％；95.8％，87.5％；100％，87.5％。腹股溝淋巴結(jié)95.8％，81.25％；100％，81.25％；100％，87.5％。大腦4.16％，0％；12.5％，O％；16.7％，0％。小腸54.16％，37.5％；83.33％，56.25％；87.5％，56.25％。腎臟37.5％，18.75％；58.33％，25％；0％，0％。心肌、肝臟和胃均未檢出陽

7、性細胞。
　　 IFA檢測強毒組在接種后的10-14天各組織的熒光陽性反應(yīng)達到最強，而弱毒組無明顯熒光反應(yīng)； IHC檢測強毒組各組織陽性細胞的峰值出現(xiàn)在接種后的3-21天，在此期間弱毒組無明顯峰值出現(xiàn)，強弱毒組差異顯著； ISH檢測強毒組各組織陽性細胞的峰值出現(xiàn)在接種后的5-21天，強弱毒組陽性細胞數(shù)具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。IFA和IHC檢測腎小球呈陽性反應(yīng)，但ISH檢測呈陰性，PCR檢測弱毒組及強毒組的多數(shù)腎臟呈陰性，據(jù)以上結(jié)果