斜帶石斑魚兩種hepcidin基因的分子克隆和生物特性研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文斜帶石斑魚兩種hepcidin基因的分子克隆和生物特性研究姓名：周京賡申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：秦啟偉20100605毒( S G I V ) 、革蘭氏陰性菌創(chuàng)傷弧菌、革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和真菌釀酒酵母后，E C ．h c p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 的轉錄水平均出現(xiàn)明顯的上調，而且E C - h e p c i d i n l 的轉錄

2、上調相對于E C ．h e p c i d i n 2 更明顯。此外，石斑魚在注射F e C l 2后，肝中的E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 轉錄水平也發(fā)生明顯的上調，E C ．h e p c i d i n l 的轉錄上調相對于E C ．h e p c i d i n 2 也更明顯。E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2

3、 對于鐵離子代謝的調節(jié)作用可能有利于發(fā)揮其抑菌作用。我們通過人工合成E C ．h e p c i d i n l 和E C - h e p c i d i n 2 多肽來檢測它們的活性。人工合成的E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 均能顯明抑制創(chuàng)傷弧菌和釀酒酵母的生長，并且隨多肽濃度的提高其抑菌作用變強，而對金黃色葡萄球菌的抑菌作用不明顯。此外，我們發(fā)現(xiàn)E C - h e p c

4、 i d i n l 的抑菌活性要明顯強于E C ．h e p c i d i n 2 。本論文中發(fā)現(xiàn)含有4 個半胱氨酸的h e p c i d i n ( E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 ) 具有抑菌活性，這種結構的h e p c i d i n 鮮有報道，雖然很多8 或6 個半胱氨酸的h e p c i d i n已報道具有活性。我們構建了h e p c i d i n

5、與綠色熒光蛋白( G F P ) 的融合表達載體，以此來研究h e p c i d i n 在石斑魚細胞中的定位。將h e p c i d i n - G F P 表達載體轉染進石斑魚脾細胞( G S ) 后，E C ．h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 均在細胞中均勻分布，但是在細胞感染病毒S G I V 的早期，E C ．h e p c i d i n l 向細胞膜聚集并形成環(huán)狀結構。

6、將病毒S G I V 分別和E C - h e p c i d i n l 和E C ．h e p c i d i n 2 合成多肽孵育后再感染體外培養(yǎng)的G S 細胞，發(fā)現(xiàn)和E C ．h e p c i d i n l 作用后，病毒對細胞的感染進程明顯變緩，提示E C - h e p c i d i n l 可能在阻止病毒入侵方面起重要作用。關鍵字：斜帶石斑魚；抗茵肽h e p c i d i n ；基因克??；抗菌活性；新加坡石斑魚虹彩