斜帶石斑魚抗菌肽-2的基因克隆、活性及其組織內(nèi)表達.pdf

1、近年來，在養(yǎng)殖業(yè)暴發(fā)的大規(guī)模的感染性疾病導(dǎo)致了海水魚類的大量死亡，而抗菌肽被證明是魚類非特異性免疫的一種主要機制而可能用于對抗感染性疾病。抗菌肽(antimicrobialpeptides)是具有抗菌活性的肽類的總稱。目前發(fā)現(xiàn)抗菌肽或類似抗菌肽的小分子肽類廣泛存在于昆蟲、水產(chǎn)動物、兩棲類、鳥類、哺乳動物、植物和微生物中。由cDNA編碼的抗菌肽-2是從斜帶石斑魚(orange-spottedgrouper,Epinepheluscoioi

2、des)cDNA文庫中分離出來。這個抗菌肽由52個氨基酸殘基組成，其中包括了信號肽(22個氨基酸殘基)和成熟肽(30個氨基酸殘基)。　　本實驗結(jié)果分為以下三部分：首先，運用PCR技術(shù)擴增抗菌肽-2(epinecidin-2)的全基因，并與其cDNA序列相比較，從而得到具有3個內(nèi)含子和4個外顯子的基因結(jié)構(gòu)。同時運用反向PCR技術(shù)擴增得到其上游調(diào)控序列，序列包括了TATA區(qū)，CAAT區(qū)等調(diào)控序列；接著，運用化學(xué)固相合成的方法合成高純度的成

3、熟抗菌肽-2，并用稀釋法對16種革蘭氏陰性和陽性菌進行了抑菌實驗，這些細菌大部分都是水生病原菌，其中抗菌肽-2對溫和氣單胞菌、少動假單胞菌、施氏假單胞菌以及摩根爾摩根菌表現(xiàn)了較強的抑菌效果(最低殺死濃度(MBC)＜8μM)，對其他的菌種也有一定的抑菌效果；最后，運用半定量RT-PCR和原位雜交方法，檢測抗菌肽-2在斜帶石斑魚各組織(包括心，脾，腦，腎，肝，皮膚，鰓和腸等)的表達分布，并初步研究注射免疫調(diào)節(jié)劑與抗菌肽表達量的時間依賴關(guān)系和