斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）催乳素（PRL）及其受體（PRLR）的cDNA克隆和PRL基因的表達(dá)研究.pdf

1、通過隨機測序和PCR篩庫,我們從斜帶石斑魚的垂體cDNA文庫中得到了一個全長cDNA.該cDNA全長1342bp,含有636bp的開放讀碼框,編碼212個氨基酸的多肽鏈.這條多肽鏈上前24個氨基酸為信號肽,后188個為成熟肽.經(jīng)過序列分析確認(rèn)為斜帶石斑魚的PRL.Northern blot在斜帶石斑魚的垂體總RNA中檢測到一種約1.4kb的轉(zhuǎn)錄形式,表明斜帶石斑魚垂體中可能只存在一種PRL的轉(zhuǎn)錄形式.應(yīng)用一步法RT-PCR結(jié)合South

2、ern blot分析,我們研究了PRL在斜帶石斑魚不同組織和早期發(fā)育時期的表達(dá)情況.結(jié)果顯示,PRL在斜帶石斑魚的垂體中有大量表達(dá);除此以外,在嗅球、前腦、中腦、下丘腦、后腦、延腦、鰓、脾和脂肪組織也有表達(dá),在腎、肝、血細(xì)胞中有微弱表達(dá).同時,我們也檢測到PRL在Ⅱ期卵巢中的表達(dá)水平低于Ⅲ期卵巢.斜帶石斑魚早期發(fā)育時期,從受精卵到受精后6小時PRL基因表達(dá)量較低,其中在受精后2h15min未檢測到,而從受精后9小時開始,表達(dá)量明顯升高,

3、并在以后的發(fā)育過程中維持這個水平.為了更好地了解PRL在斜帶石斑魚中的生理功能,我們利用PCR方法從斜帶1石斑魚垂體總RNA中得到了PRL受體(PRLR)的cDNA全長序列.該全長cDNA有2114bp,編碼區(qū)有1458bp,編碼486個氨基酸構(gòu)成的多肽.經(jīng)SMART分析,該氨基酸序列具有以下特點:前20個氨基酸為信號肽序列;序列內(nèi)部23親水個氨基酸為跨膜區(qū);細(xì)胞外區(qū)由209個氨基酸組成;細(xì)胞內(nèi)區(qū)由234個氨基酸組成;細(xì)胞外區(qū)67、86