乳酸鏈球菌菌素治療奶牛隱性乳腺炎的研究.pdf

1、本論文首先對某奶牛場隱性乳腺炎的病菌進行調查，然后研究了Nisin對奶牛乳腺的刺激性、對奶牛隱性乳腺炎尤其是由金黃色葡萄球菌引起病例的治療效果。
　　 1.杭州近郊某奶牛場隱性乳腺炎主要病原菌的調查
　　 為了解杭州近郊某奶牛場奶牛隱性乳腺炎的主要病原菌，首先用杭州乳腺炎快速診斷試劑對該牧場的兩個牛棚進行隱性乳腺炎檢測，采集檢測結果為“+++”強陽性乳區(qū)奶樣89個進行細菌學檢驗，并對分離的主要病原菌進行藥敏試驗以及牛奶中

2、SCC和NAGase酶活性的測定。結果顯示：在該牧場分離的奶牛隱性乳腺炎的主要病原菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和凝固酶陰性葡萄球菌。金黃色葡萄球菌對青霉素G、氨芐西林和苯唑青霉素均有較高的耐藥率；無乳鏈球菌對以上常規(guī)的抗生素保持著較高的敏感性；而凝固酶陰性葡萄球菌對青霉素G、氨芐西林、苯唑青霉素和鏈霉素均有較高的耐藥率。因此，該場引起奶牛隱性乳腺炎的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌以及凝固酶陰性葡萄球菌，葡萄球菌對青霉素類藥物已

3、經產生耐藥性。
　　 2.Nisin Z對奶牛乳腺的刺激性
　　 Nisin作為治療奶牛隱性乳腺炎的藥物在應用之前，必須要對其進行藥物刺激性試驗，以便篩選出治療奶牛隱性乳腺炎的最佳劑量。本試驗選擇1頭處于泌乳中期且四個乳區(qū)均健康的荷斯坦奶牛，分別將三個不同的劑量組的Nisin制劑于擠奶結束后分別灌注于右前、右后以及左后乳區(qū)，左前乳區(qū)灌注250mL生理鹽水作為對照組，然后在灌注結束后24h、48h、72h、96h以及1周時

4、進行SCC及NAGase酶活性的檢測。
　　 試驗結果表明，除了5.0×106IU劑量組有明顯的臨床癥狀外，其他劑量組與對照組均無明顯的臨床癥狀。灌注三種不同劑量的藥物后，三個灌注乳區(qū)牛奶體細胞數在24h時均明顯升高，但是24h后又逐漸下降，至1周時恢復正常水平，而對照組乳區(qū)則無顯著變化。牛奶中NAGase酶活性檢測結果表明，灌注藥物后24h后，兩個高劑量組NAGase酶活性均升高，然后在24～72h保持穩(wěn)定，隨后NAGase酶

5、活性恢復至正常水平；而125×106IU劑量組與對照組在灌注后24h、48h與72h時，NAGase酶活性則略微升高，隨后便恢復至正常水平。上述結果表明，2.5×106IU與1.25×106IU對奶牛乳腺的刺激性最小，結合前期Nisin乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎的抑菌效果，選擇2.5×106IU作為治療奶牛隱性乳腺炎的治療劑量。
　　 3.Nisin Z乳房灌注劑對奶牛隱性乳腺炎治療效果
　　 90頭泌乳中期其患隱性乳

6、腺炎的荷斯坦奶牛，被隨機分成試驗組，對照組。試驗組奶牛乳腺內灌注Nisin乳房灌注劑，每天一次，連續(xù)三天，對照組則按照牧場常規(guī)不采取治療。通過檢測治療前后HMT變化、細菌學檢查、牛奶體細胞計數、以及牛奶中NAGase酶活性變化，確定Nisin乳房灌注劑對奶牛隱性乳腺炎的治療效果。
　　 細菌學檢查結果可以看出，患病乳區(qū)分離的主要病原菌為金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌和無乳鏈球菌；經過Nisin治療后第2周后，試驗組與對照組細

7、菌學轉陰率分別為65.2％和15.9％，統(tǒng)計學差異極顯著；其中各試驗組與對照組主要致病菌在治療后第2周其細菌學轉陰率分別為：金黃色葡萄球菌為50.0％和18.2％，無乳鏈球菌為90.9％和1.40％，凝固酶陰性葡萄球菌為58.8％和27.3％，兩組細菌學轉陰率同期比較，金黃色葡萄球菌與凝固酶陰性葡萄球菌均無統(tǒng)計學差異，而無乳鏈球菌則差異極顯著；NAGase酶活性檢測結果表明，試驗組在經Nisin乳房灌注劑治療第1、2周后，牛奶中在NAG

8、ase酶活性均顯著減低，而對照組則無顯著差異；牛奶體細胞計數結果顯示，試驗組在治療后第1、2周牛奶中體細胞≤5.0×105個/mL的百分比為41.3％和32.6％，而對照組則分別為18.2％和9.1％，兩組同期比較差異均極顯著。因此，Nisin乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎具有良好的效果。
　　 4.Nisin Z治療奶牛隱性乳腺炎降低桶奶體細胞含量
　　 本試驗在安徽試驗基地選擇兩個牛棚，其中試驗組牛棚含85頭，對照組牛

9、棚含90頭，選擇的奶牛均為處于泌乳中期的荷斯坦奶牛。3～7月對兩個牛棚進行如下內容檢查：桶奶體細胞數、桶奶乳成份、桶奶細菌數。8～12月用Nisin乳房灌注劑對試驗組中隱性乳腺炎病例進行治療，每天一次，連續(xù)三天，對照組則按照牧場常規(guī)不采取治療。然后每個月分別檢測桶奶體細胞數、桶奶細菌數、桶奶中乳成份以及利用ECLIPSE50檢測桶奶中Nisin Z的殘留，以確定Nisin乳房灌注劑是否能夠降低桶奶體細胞數。試驗組隱性乳腺炎病例采取治療措

10、施后，桶奶體細胞數8～12月份均顯著低于對照組；桶奶細菌數顯著低于對照組；桶奶中蛋白質、脂肪、乳糖與非脂質固體的含量均高于對照組。當試驗牛群用Nisin灌注劑同時治療隱性乳房炎病例少于10個時，桶奶ECLIPSE50法試驗為陰性。因此，Nisin乳房灌注劑對牛群中奶牛隱性乳腺炎病例治療后能夠有效的降低桶奶體細胞數。
　　 5.Nisin Z治療奶牛隱性型乳腺炎后在牛奶中的殘留
　　 本試驗通過選擇3頭泌乳中期患隱性乳腺炎

11、的奶牛，用Nisin乳房灌注劑治療患病乳區(qū)，每天一次，連續(xù)三天；未治療的相鄰乳區(qū)作為對照。治療結束后24h、48h、72h與96h后利用國標法檢測治療乳區(qū)與對照乳區(qū)的Nisin Z殘留。結果表明，Nisin灌注劑治療后24h牛奶中Nisin Z的殘留量為75.81±36.50 IU/mL，遠低于國家標準規(guī)定的乳制品中Nisin的最大允許添加量，而相鄰乳區(qū)的混合奶樣，則無Nisin檢出。發(fā)酵培養(yǎng)試驗結果表明，在治療后24h采集治療乳區(qū)牛奶

12、經發(fā)酵培養(yǎng)會被抑制，但24h后檢測均沒有抑制發(fā)酵；而對照乳區(qū)采集的混合奶樣經發(fā)酵培養(yǎng)均不會被抑制。本試驗說明Nisin治療奶牛隱性乳腺炎后24h，治療乳區(qū)牛奶中的Nisin Z的殘留量遠低于國家標準，但灌注乳區(qū)的牛奶在治療后24h會抑制發(fā)酵培養(yǎng)。
　　 6.Nisin Z在不同炎癥程度牛奶中的降解
　　 選擇牛奶SCC在0～2.0×105個/mL的正常奶牛、SCC在1.0～2.0×106個/mL的隱性乳腺炎奶牛以及臨床型

13、乳腺炎奶牛各3頭，然后分別采集正常乳區(qū)與患病乳區(qū)的牛奶各10mL，首先測定了三種不同炎癥程度牛奶中NAGase酶的活性，然后在牛奶中加入Nisin，在37℃培養(yǎng)。分別檢測0h、2h、4h、6h與8h后Nisin在牛奶中的殘留量。結果表明：Nisin在不同牛奶中的降解速度不一，從高到低依次為：正常牛奶、隱性乳腺炎牛奶和臨床型乳腺炎牛奶。隨著時間的增加，Nisin活性減少。
　　 7.Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗聯(lián)合應用治療奶牛隱

14、性乳腺炎
　　 選擇處于泌乳中期的荷斯坦奶牛75頭，每頭牛有一個隱性乳腺炎乳區(qū)。奶牛被隨機分成三組，Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗聯(lián)合治療組，Nisin治療組，對照組，且每組各25頭。在Nisin與疫苗聯(lián)合治療組中，首先在擠奶結束后于奶牛乳腺上淋巴結注射金黃色葡萄球菌疫苗2mL，1周后對患病乳區(qū)開始灌注Nisin Z制劑，每天一次，連續(xù)三天，灌注結束后1周第二次在乳腺淋巴結注射疫苗2mL； Nisin治療組則是每天灌注Nisin

15、 Z制劑一次，連續(xù)三天；對照組則不采取治療。然后在處理前與治療后第2、4和6周采集樣品，分別檢測HMT強陽性率、牛奶體細胞數、NAGase酶活性以及細菌學檢查。
　　 兩個治療組同期比較均均無差異，但與治療前及對照組比較差異極顯著。兩個治療組同期比較均無統(tǒng)計學差異，但是與治療前及對照比較差異均極顯著。細菌學檢查表明，Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗治療組、Nisin治療組與對照組在第2、4和6周的細菌學治愈率分別為(68.0％、4

16、4.0％、0)，(72.0％、40.0％、0)和(72.0％、40.0％、0)，而兩個治療組同期比較，其中第2周比較差異不顯著，第4周和第6周差異均顯著，而與對照組比較差異均極顯著。對治療前后牛奶中乳成份的變化進行分析可以看出，治療后第2、4和6周牛奶中蛋白質、脂肪、乳糖與總固體的含量均呈升高趨勢，去治療前以及對照組相比較差異均為顯著，但是兩個治療組同期比較差異均不顯著。上述試驗結果表明，利用Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗聯(lián)合治療奶牛隱

17、性乳腺炎病例，尤其是由金黃色葡萄球菌引起的隱性乳腺炎病例，效果要優(yōu)于單獨用Nisin治療。
　　 綜上所述，杭州近郊某奶牛場奶牛隱性乳腺炎的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌與凝固酶陰性葡萄球菌，且葡萄球類細菌已經對青霉素類藥物產生耐藥性。Nisin Z制劑對奶牛乳腺的刺激性試驗表明，2.50×106IU適合作為治療奶牛隱性乳腺炎的劑量。利用Nisin乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎均有良好的治療效果，而且在治療后24h牛奶中N