PCR法鑒定變形鏈球菌與遠(yuǎn)緣鏈球菌的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文PCR法鑒定變形鏈球菌與遠(yuǎn)緣鏈球菌的研究姓名：于寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉淑杰2001.4.1CTACATCTCCAATGCCA一35‘一TAGCCTTAGAGTCTCCTGC一3’以細(xì)菌DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)物加樣于1.5%的瓊脂糖凝膠電泳上，嗅乙嚨染色紫外燈下觀察結(jié)果。結(jié)果所有變鏈菌株僅在1200bp處有一條擴(kuò)增帶，而遠(yuǎn)緣鏈球菌株僅在700bp處有一條擴(kuò)增帶。4份唾液標(biāo)本經(jīng)

2、TYCSB培養(yǎng)，增菌后可以檢測(cè)出遠(yuǎn)緣鏈球菌，6份唾液直接提取菌體DNA可以檢測(cè)出遠(yuǎn)緣鏈球菌。討論對(duì)變鏈菌及遠(yuǎn)緣鏈球菌最基礎(chǔ)的鑒定是根據(jù)形態(tài)及特殊生化實(shí)驗(yàn)，雖然較為簡(jiǎn)便、直觀，但只能初步鑒定變鏈菌及遠(yuǎn)緣鏈球菌，不能把二者完全分開。免疫化學(xué)技術(shù)中雖較生化方法及形態(tài)學(xué)鑒定有更大準(zhǔn)確性，但應(yīng)用范圍不廣。盡管DNA探針技術(shù)特異性強(qiáng)，但耗時(shí)長，且方法復(fù)雜。PCR法是近年來才發(fā)展起來的技術(shù)，Igarash于19%年首先應(yīng)用dex基因(變鏈菌Ingbr

3、itt株)合成兩條寡核昔酸引物，對(duì)從口腔中可以分離出來的G球菌、G桿菌、G球菌，G一桿菌60株進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果僅有8株變鏈菌出現(xiàn)1200bp的擴(kuò)增帶，而其它細(xì)菌均無此條帶。說明此引物可以把變鏈菌從口腔其它細(xì)菌中鑒別出來。Igarash在此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的引物可檢測(cè)出lpg的DNA染色體，相當(dāng)于12CFUml細(xì)菌。HIda等于1999年應(yīng)用dex基因(遠(yuǎn)緣鏈球菌UAB66株)用PCR法制備了鑒定遠(yuǎn)緣鏈球菌的探針，亦可以把遠(yuǎn)緣鏈球菌從口腔其它細(xì)菌