鏈球菌、腸球菌

1、實(shí) 驗(yàn) 十球菌、腸道菌,,目的要求：,1.掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。2.掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。3.掌握抗“o”試驗(yàn)的操作及臨床意義,,鏈球菌的溶血性,,β溶血性鏈球菌,,肺炎鏈球菌 S. pneumoniae,形態(tài)與染色：G+球菌,矛頭狀 ,成雙排列，寬端相對，尖端向外,有莢膜,,肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜,,肺炎鏈球菌 S. pneumoniae,培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求高，兼

2、性厭氧。初次分離需提供5%-10%的CO2。,,18-24h后血平板上形成灰白色、圓形、針尖樣的菌落。菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。,,肺炎鏈球菌 S. pneumoniae,培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h后，菌落有自溶現(xiàn)象，菌落的中心會(huì)出現(xiàn)凹陷，像“肚臍”稱臍狀凹陷。,,肺炎鏈球菌 S. pneumoniae,主要生化反應(yīng) optochin試驗(yàn): 含5μg optochin 紙片貼于 涂布有待測菌的平板上35℃孵育過夜，抑菌圈大于14

3、mm即為敏感。,,痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色,A群(化膿性)鏈球菌,生物學(xué)性狀,球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽性(G＋)， 無芽胞，無鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。,1. 形態(tài)與染色,,,化膿性鏈球菌,A群(化膿性)鏈球菌,生物學(xué)性狀,營養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基； 液體培養(yǎng)為沉淀生長； 血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同 菌株溶血不一， 多數(shù)有透明溶血環(huán)(b溶血現(xiàn)象)。,2. 培養(yǎng)特性,,桿菌肽敏感試驗(yàn)

4、 原理：A群化膿性鏈球菌對桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。 方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。 結(jié)果判斷：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，推斷為A群化膿性鏈球菌。,,B,化膿性鏈球菌桿菌肽陽性,,無乳鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽性,,CAMP陽性,,Lancefield血清凝集分型,,,腸球菌屬,步驟和方法1、菌落觀察:

5、 將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無溶血環(huán)。,,2、形態(tài)觀察 涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)及排列。 腸球菌形態(tài)類似鏈球菌，為單個(gè)、成雙或短鏈狀排列的卵圓形革蘭氏陽性球菌。,,3、生化反應(yīng)： （1）觸酶試驗(yàn)：腸球菌屬為陰性反應(yīng)。 （2）膽汁-

6、七葉苷試驗(yàn)： 原理：培養(yǎng)基的膽汁對某些細(xì)菌有抑制作用，只有既能在膽汁中生長，又能水解七葉苷的細(xì)菌才能表現(xiàn)出對七葉苷的水解活性。腸球菌能在膽汁中生長，并水解七葉苷，使培養(yǎng)基變黑。,,方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基，35℃孵育18~24h。 結(jié)果：細(xì)菌生長，且培養(yǎng)基變黑色或棕褐色為陽性，不變色為陰性。腸球菌為陽性。,（3）65g/L NaCl生長試驗(yàn)：

7、 原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/L NaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長。 方法：將待檢菌接種65g/L NaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。 結(jié)果：細(xì)菌生長且使得培養(yǎng)基變黃為陽性，不生長為陰性，腸球菌為陽性。,,（3）PYR試驗(yàn)： 原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR

8、），釋放出β-萘基酰胺，與PYR試劑作用形成紅色復(fù)合物。 方法：挑取被檢菌落在含有PYR的紙片上涂擦， 35℃孵育5min，再于紙片上滴加PYR試劑，觀察紙片顏色。 結(jié)果：約1min后紙片呈紅色為陽性，不變色為陰性。腸球菌、A群鏈球菌和某些凝固酶陰性的葡萄球菌為陽性。,,,腦膜炎奈瑟菌,,痢疾志賀菌,,傷寒沙門菌,,霍亂弧菌,,結(jié)核分枝桿菌,

9、,白喉?xiàng)U菌,,破傷風(fēng)桿菌,,產(chǎn)氣莢膜桿菌,,白色念珠菌,,肉毒桿菌,,淋球菌,,炭疽桿菌,,二、抗“o”實(shí)驗(yàn),1.實(shí)驗(yàn)原理：溶血性鏈球菌能產(chǎn)生溶血素“o”，鏈球菌感染患者，血清中可出現(xiàn)針對溶血素“o”的抗體。2.操作： （1）加待測血清，陰性、陽性對照血清各1滴 （2）將膠乳液輕輕搖勻后，每孔各加1滴膠乳試劑 （3）輕輕搖動(dòng)玻片，使膠乳液與血清混合均勻 （4）每孔各用一個(gè)攪拌棒進(jìn)行攪拌，使膠乳