采用RAPD標(biāo)記研究西瓜種質(zhì)資源的親緣關(guān)系.pdf

1、本試驗以四川農(nóng)業(yè)大學(xué)保存的西瓜種質(zhì)資源為材料(共26個材料)。通過田間、室內(nèi)的調(diào)查進(jìn)行西瓜的生物學(xué)性狀的統(tǒng)計分析；采用改良CTAB法對西瓜屬基因組DNA進(jìn)行提??；對西瓜的RAPD反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化；篩選適用于本試驗的隨機(jī)引物；計算材料間的遺傳距離并對材料進(jìn)行聚類分析.結(jié)果如下：
　　 1、通過田間和室內(nèi)對26個西瓜材料的生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察統(tǒng)計。結(jié)果表明這些材料在倒蔓期、開花期、坐果節(jié)位、結(jié)果數(shù)、果型，果重、果皮硬度、果皮顏色、果

2、肉色、果皮厚、皮肉界限、種子大小多少顏色、TSS等方面均存在一定的差異。
　　 2、本研究使用的改良cTAB法和SDS法分別對26個西瓜材料進(jìn)行了基因組DNA的提取，經(jīng)分析表明，改良后的cTAB法更適用于西瓜屬基因組DNA的提取，提取的DNAOD260/OD280比值在1.83-2.11之間，這說明所提取的DNA的質(zhì)量較高，能夠用于RAPD的分析。
　　 3、采用正交試驗設(shè)計的方法，建立了西瓜RAPD分析的優(yōu)化反應(yīng)體系。

3、所得最優(yōu)體系為：每25μL反應(yīng)體系中含引物0.4μmol/L、Mg2+1.5mmol/L、Taq DNA聚合酶2.5U、dNTPs250μmol/L、1×Buffer、模板DNA10ng/μl;適宜擴(kuò)增條件為預(yù)變性94℃，時間5min;變性94℃，時間30s;退火37℃，時間1min:延伸72℃，時間1min;循環(huán)次數(shù)35圈，72℃保溫7min，4℃保存。
　　 4、從60個隨機(jī)引物中篩選出3個，用這3個引物對26份西瓜材料的D

4、NA樣品進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出了56條，平均每個引物18.67條，其中51條具有多態(tài)性，占總條帶數(shù)的91.07％，平均為每個引物17條多態(tài)性帶。
　　 5、利用計算機(jī)軟件DPS軟件統(tǒng)計RAPD數(shù)據(jù)，Genetic Distance法計算材料間遺傳距離。得出所研究的26個材料遺傳距離介于0.1628-0.5694之間；用UPGMA進(jìn)行聚類，當(dāng)相似系數(shù)為0.31時，可以將26份材料分為8大類群：1個華北生態(tài)地理型，1個華東生態(tài)地理型，1