寒地蘋果種質資源RAPD分子標記及其核心種質初步構建.pdf

1、寒地蘋果種質資源是寒地果樹資源的寶貴財富，對其深入研究有利于今后更科學有效的保存與利用。本試驗主要以RAPD(隨機擴增多態(tài)性DNA)分子標記為主要研究方法，對寒地蘋果種質資源遺傳多樣性進行研究，以期揭示不同資源間的親緣關系及其分類地位；尋找不同資源的特有RAPD標記，為今后的資源研究、品種鑒定、育種親本選擇及雜交后代性狀預測、早期選擇提供依據(jù)；并初步構建寒地蘋果的核心種質，以便資源的高效管理及遺傳多樣性的準確利用。主要研究內容如下：

2、 1.改進了傳統(tǒng)的SDS基因組DNA提取方法，更適于提取富含蛋白質、果膠類多糖及多酚類化合物等次生代謝產物的蘋果屬植物葉片基因組DNA。 2.優(yōu)化了RAPD反應體系。所得最優(yōu)反應體系為：反應體積251μl，其中模板DNA 20 ng/μl，引物1.0μl濃度10pM，Tag DNA聚合酶1.0U，dNTP 0.2 mmol/L，PCR Buffer(含Mg<'2+>)2.5μl。擴增程序為：預變性94℃4min，變性94℃4

3、5s，退火溫度(37℃)45s，72℃延伸120s，共35個循環(huán)后，在72℃繼續(xù)延伸5min，然后在4℃保存。 3.利用RAPD技術對寒地蘋果266份種質資源遺傳變異進行了研究，從200個10 bp隨機引物中篩選出25個多態(tài)性引物用于正式擴增，共擴增出245條DNA帶，其中多態(tài)性 DNA 帶229條，多態(tài)位點百分比達到93.47％。平均每個引物擴增的DNA帶的數(shù)目為9.8條。 4.有33份資源擴增出了1個以上的特有RAP

4、D標記，據(jù)此可以進行資源鑒定或以此為親本的雜交后代早期選擇。 5.利用DNA擴增結果構建初級核心種質180份，對其進行再聚類分析，得到如下結論： ①驗證了前人對山荊子系、海棠系和隴東海棠系親緣關系的經典分類。但一些野生種的親緣關系與經典分類學存在差別，有待進一步深入研究。 ②雜交后代的遺傳關系復雜，尚無分類歸屬，作者提出應將這部分資源在分類地位上單獨列出一系——雜種群系的建議。 6.首次嘗試對寒地蘋果種質