仁用杏種質資源親緣關系的SRAP分子標記研究.pdf

1、仁用杏為我國北方特有經(jīng)濟作物,品種類型豐富,但其遺傳背景和親緣關系尚不清楚。本研究對我國主要栽培種植的仁用杏資源進行了SRAP分析,從分子水平上明晰了遺傳背景、建立了親緣關系圖譜。
　　 基于對基因組DNA不同提取方法的比較,確定了適用于仁用杏基因組DNA提取的方法為改良CTAB法,效果較好。
　　 通過正交試驗,建立與優(yōu)化了仁用含SRAP-PCR標記反應體系:在反應總體積20μL中,Mg2+2.5 mmol/L,Taq

2、 DNA聚合酶1.5 U,dNTPs0.2 mmol/L,引物0.9μmol/L,10×Buffer2μL,DNA模板50 ng。
　　 通過單因子實驗確定了PCR程序為:94℃預變性5 min；94℃變性1 min,35℃復性1 min,72℃延伸1.5 min,5個循環(huán)；94℃變性1 min,52℃復性1 min,72℃延伸1.5 min,28個循環(huán)；最后72℃延伸10 min,4℃保存。
　　 利用4份DNA模板進

3、行81對引物篩選試驗,選擇出了條帶清晰、穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的15對引物。采用篩選出的15對引物對供試的28份杏基因組DNA進行SRAP分子標記分析,對瓊脂糖凝膠圖譜中清晰、穩(wěn)定的條帶(200-2000 bp)進行Gel-Pro軟件讀帶分析,15對引物共產(chǎn)生286條譜帶,每對引物組合可產(chǎn)生13-27條,平均每對引物產(chǎn)生19.1條,其中多態(tài)性條帶共252條,平均每對引物產(chǎn)生16.8條,多態(tài)性條帶占總帶數(shù)的88.11％。這些結果表明,優(yōu)化的S

4、RAP-PCR體系能較好地揭示出仁用杏種質資源的遺傳多樣性,適用于其遺傳背景分析以親源關系研究。
　　 利用一對引物組合(Me4-Em4)的瓊脂糖凝膠電泳圖譜,編制了28份杏材料的指紋檢索表。
　　 15對引物的電泳結果數(shù)據(jù)導入POPGENE V1.32軟件,對仁用杏的遺傳多樣性進行分析。仁用杏組的香農(nóng)指數(shù)為0.4112,普通杏組的香農(nóng)指數(shù)為0.2763；組內遺傳變異度占總變異度的83.95％,組間遺傳變異度占16.05

5、％。結果表明,仁用杏的遺傳多樣性較高,遺傳變異主要存在于組內。
　　 利用POPGENE V1.32軟件分析仁用杏、山杏和普通杏的親緣關系,結果表明,仁用杏與普通杏遺傳一致度為0.8374,與山杏遺傳一致度為0.8338,可見仁用杏與普通杏親緣關系近。
　　 對供試杏材料的SRAP指紋圖譜進行UPGMA聚類分析,28份基因型相似系數(shù)為0.50-0.91,在相似系數(shù)為0.70時,所有供試材料聚為4組,這與形態(tài)學分類結果基本