真姬菇品種改良及其相關性研究.pdf

1、真姬菇又名白玉、海鮮菇，是一種營養(yǎng)豐富的食用兼藥用的珍稀食用菌，也是近年來風靡日本市場，深受消費者青睞的食用菌珍品。該菇形態(tài)美觀，質地脆嫩，味道鮮美，現(xiàn)已成為全國食用菌工廠化生產(chǎn)的重要品種之一。真姬菇在工廠化生產(chǎn)中存在著栽培周期長(120—150d)、栽培條件苛刻、抗逆性差、產(chǎn)品品質參差不齊等問題，在一定程度上限制了其規(guī)?；l(fā)展。漆酶具有降解木質素，氧化降解酚類物質，抑制雜菌，改善出菇品質等作用。本研究以漆酶活性較高的云芝和無漆酶活性的

2、真姬菇作為實驗材料，采用酶學與原生質體融合相結合的技術，將云芝原生質體經(jīng)高溫滅活與真姬菇原生質體融合，從而得到的高漆酶活性的真姬菇優(yōu)良品種。
　　 本文從9個不同品種的真姬菇菌種，通過在平皿中比較菌絲生長速度、菌絲濃密、長勢，篩選出生長速度快、菌絲致密、長勢旺盛的白玉作為出發(fā)菌株；從9個不同品種的靈芝菌種，通過比較各菌種在RB亮藍—PDA中的變色圈和變色速度，篩選出變色圈大和變色速度強的云芝作為出發(fā)菌株。
　　 然后以篩

3、選得到的白玉和云芝作為出發(fā)菌株，對它們進行原生質體制備、再生的實驗，結論如下：白玉原生質體制備和再生最佳條件是：2％溶壁酶處理3h，RM2為再生培養(yǎng)基；云芝原生質體制備和再生的最佳條件是：3％的溶壁酶酶解3h，RM2為再生培養(yǎng)基。接著，將制備好的云芝原生質體采用55℃水浴45min滅活后，同白玉的原生質體按1：1混合，在32℃下以PEG(4000)為融合劑，處理25min。在再生培養(yǎng)基上生長的融合菌株，采用RB—PDA平板顯色技術，篩選

4、出變色圈大和變色速度強的合菌株RS01～RS04。隨后比較它們同出發(fā)菌株白玉和云芝漆酶活性的差異，復篩出高漆酶的融合菌株RS01。
　　 對合菌株RS01～RS04進行拮抗實驗，顯示融合菌株RS01～RS04同出發(fā)菌株間白玉和云芝之間都有明顯的拮抗現(xiàn)象，表明它們之間存在不親和性，初步鑒定屬于融合的新菌株。應用RAPD技術和ISSR技術進一步分析，根據(jù)擴增的DNA圖譜，表明融合菌株RS01～RS04的親緣關系比較接近白玉，同云芝的

5、遺傳差異比較大。
　　 融合菌株RH01～RH04連續(xù)轉接5代后的穩(wěn)定性顯示RH01的穩(wěn)定性最好。融合菌株RH01生長特性的實驗表明：RH01的菌絲形態(tài)介于出發(fā)菌株白玉和云芝之間：在16×40倍的普通顯微鏡下觀察，菌絲也存在差異；進行霉菌抗耐能力比較，RH01的拮抗圈最大，表明它的對霉菌抗耐能力最強。生物學特性試驗結果：融合菌株RH01的培養(yǎng)基優(yōu)化試驗結果表明在PDA胡蘿卜培養(yǎng)基上生長旺盛，活力較強，菌絲濃密、潔白；融合菌株RH